包埋2玻璃化法冷冻保存湛江等鞭金藻的研究刘丽娜-水生生物学报.PDFVIP

第 31 卷 第 2 期 水 生 生 物 学 报 Vol . 3 1 ,No . 2 2 0 0 7 年 3 月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA Mar . , 2 0 0 　7 包埋玻璃化法冷冻保存湛江等鞭金藻的研究 刘丽娜 　王起华 　张恩栋 　张丽佳 ( 辽宁师范大学生命科学学院 ,大连 　116029) ( ) 摘要 :采用包埋玻璃化法冷冻保存湛江等鞭金藻 Isochrysis zhanj iangensis ,探讨了装载液成分和浓度 、装载时间、脱 ( ( ) 水时间、洗涤液浓度及洗涤时间对超低温保存后存活率的影响 。结果表明在 20 ℃50 %PVS PVS :30 %甘油 GL Y + ( ) ( ) ) 20 % 乙二醇 EG + 10 %二甲基亚砜 DMSO ,用 f/ 2 培养基定容 装载 45h ,0 ℃100 %PVS 脱水 50min ,冻存 24h 后取 出冻存管并迅速投入 40 ℃恒温水浴中快速化冻约3min ,10mol/ L 山梨醇洗涤40min 条件下 ,湛江等鞭金藻的存活率 最高 ,为 54 % 。与常规的两步法和包埋脱水法相比 ,包埋玻璃化法简单 、快速且存活率高 ,在藻类种质保存中有广 阔的应用前景 。 关键词 : 湛江等鞭金藻 ;包埋玻璃化 ;装载 ;脱水 ;洗涤 ( ) 中图分类号 :S9844 　　文献标识码 :A 　　文章编号 2007 　　近 40 年来的研究表明,超低温保存不仅可以克 序[ 12 ] 。而采用包埋脱水法虽然方法简单 ,但存活 服藻类常规继代保存中的费力、费时、易污染等弊病 , 率较低 ,仅为 15 %[7 ] 。本文采用包埋玻璃化法研究 而且能够保持种质遗传稳定性、达到长期保存的目 了不同装载液 、装载时间、脱水时间、洗涤液浓度及 的[ 1 —3 ] 。然而 ,以往普遍采用的以两步冷冻法为主的 洗涤时间对湛江等鞭金藻超低温保存的影响 ,试图 常规超低温保存方法大都需要使用贵重的降温设备 探讨超低温保存海洋饵料金藻的一条新途径 。 和采用复杂的冷冻程序 ,使其实际应用受到很大的限 制[3 ] 。近 10 年来 ,包埋脱水法和玻璃化法两种新技 1 　材料与方法 术先后开始用于藻类种质的冷冻保存并取得了较大 11 　材料及其培养 　湛江等鞭金藻由中国科学院 进展[ 1 ,4 —7 ] 。包埋玻璃化法则是 90 年代中期在玻璃 海洋研究所提供 。藻种和实验材料均在无菌操作下 化法和包埋脱水法基础上发展起来的超低温保存植 培养在含 100mLf/ 2 培养基[ 13 ] 的 250mL 三角烧瓶 物种质的新技术[8 ] ,该法将包埋脱水法和玻璃化法的 中。培养条件为 2 1 ±1 ℃,光强 3000 ±100lx ,光周期 优点集于一身 ,已成