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马γ干扰素双抗体夹心ELISA检测方法建立 　【摘要】 目的: 建立检测马γ干扰素的双抗体夹心ELISA, 为马传染病的免疫学研究提供新方法。方法: 将识别不同表位的抗马γ干扰素的2株单克隆抗体（mAb, A5和SB10）纯化后, 利用生物素标记试剂盒对其中1株纯化的mAb（SB10）进行标记, 通过对重组马IFNγ进行ELISA检测来建立马γ干扰素双抗体夹心ELISA。结果: 经过方阵滴定实验确定捕获抗体的最佳浓度为1 mg/L, 检测抗体的工作效价为1∶1 000。利用建立的方法对不同稀释度的重组马γ干扰素和丝裂原刺激的马外周血单核细胞培养上清进行检测。结论: 此方法检测敏感度达到1 μg/L, 特异性良好, 为马的细胞免疫学研究提供了方法, 并为建立马γ干扰素ELISPOT检测方法奠定了基础。 【关键词】 马γ干扰素 夹心ELISA γ干扰素（IFNγ）是机体内具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能的重要细胞因子, 主要由激活的T细胞、NK细胞和巨噬细胞产生［1］。马IFNγ全基因编码166个氨基酸(aa), 其中包括20aa的信号肽, 信号肽切除后, 产生146aa的IFNγ单体, 有两个糖基化位点, 天然活性状态的IFNγ是由两个IFNγ单体经非共价交联形成的二聚体糖蛋白［2］。研究表明, 内源性IFNγ水平的高低在很大程度上可以反映机