高质量泰山白花丹参根部总RNA提取及DDRT-PCR检测.docVIP

高质量泰山白花丹参根部总RNA提取及DDRT-PCR检测 　 作者：王健美，史仁玖，苗苗，李艳玲，郝岗平 【摘要】 　　目的从富含多酚和多糖的泰山白花丹参根中分离出高质量RNA。方法比较了5种RNA提取方法，获得了一种以CTAB法为基础的分离高质量完整RNA的简便、快速方法。结果使用该方法从泰山白花丹参根部分离的RNA的纯度是：A260/A280为1.87，A260/A230为2.11，产量为284.62μg/g。FW 的根，电泳条带清晰，RNA完整性好。由此法所得的RNA可直接用于cDNA文库构建等分子生物学实验。结论该技术可有效地从富含多酚和多糖的泰山白花丹参根中分离出高质量RNA，为对该山东特有药材进行分子生物学研究奠定基础。 【关键词】 泰山白花丹参； 根； RNA提取 　　Abstract：ObjectiveTo explore the high quality total RNA isolation method from root of Taishan Salvia miltiorrhiza Bge. f.alba C. Y. WU et H.W. Li containing much polyphenols and amylose.MethodsSimple and rapid procedure for high-quality total RNA isolation modified from CTAB based method was obtained by comparing five RNA isolation methods. ResultsA260/A280 and A260/A230 of prepared RNA were respectively 1.87 and 2.11, and RNA amount were 284.62μg/g fresh weight of root. The results of electrophoresis showed that RNA bands were clear and showed no degradation. This high quality RNA could meet the demands of molecular analysis, such as cDNA library construction.ConclusionThis modified technique based on CTAB method may be efficient and reliable in isolating high quality RNA from Taishan Salvia miltiorrhiza Bge. f.alba C. Y. WU et H.W. Li containing much polyphenols and amylase. This study established the base for further study of this medicinal plant found only in Shandong province. 　　Key words：Taishan Salvia miltiorrhiza Bge. f.alba C. Y. WU et H.W. Li； Roots; RNA isolation 　　丹参(Salvia miltiorrhiza)是我国传统中药, 具有活血化淤、通经止痛的功能。丹参中含有二类活性成分: 脂溶性二萜醌类化合物和水溶性酚酸类化合物［1，2］。二萜醌类化合物, 如丹参酮I, 丹参酮IIA，隐丹参酮等，具有抑制血小板聚集、耐缺氧、改善冠状动脉供血等药理作用, 是治疗心血管系统疾病的重要药物；酚酸类化合物, 如丹酚酸A, 丹酚酸B、紫草酸、迷迭香酸、原儿茶醛、丹参素等, 具有很强的抗脂质氧化、抗肝纤维化、改善尿毒症、改善肾功能等作用［1，2］。两类物质都是颇有价值的药用资源，均蕴藏着巨大的市场潜力。 　　生长在泰山的白花丹参Salvia miltiorrhiza Bge. f.alba C. Y. WU et H.W. Li是紫花丹参的变型，系多年生草本植物。白花丹参除具丹参的生物活性和用途外，对治疗血栓性脉管炎具有独特疗效［1］。现在，白花丹参已作为一个新品种被收录进《山东省中药材标准》(2000 年版)［3］。通过实验研究，证明白花丹参与丹参的化学成分基本相同，含有脂溶性成分丹参酮类，水溶性成分酚酸类［4］。但是白花丹参中的水溶性成分明显高于紫花丹参，约为紫花丹参的2倍，这是化学成分方面较大的不同［3］，另外白花丹参中铁、镁、锰等5种微量元素也高于紫花丹参［5］。