鹿衔草黄酮苷对大鼠离体胸主动脉作用及机制探析.docVIP

鹿衔草黄酮苷对大鼠离体胸主动脉作用及机制探析 　作者：何秀权，叶明磊，顾袁琴，邵雪岩, 陈 曦，侯云龙，乔国芬 【摘要】 目的探讨鹿衔草黄酮苷对大鼠离体胸主动脉的作用及其可能的作用机制。方法采用离体血管实验方法，经生物信号采集与分析系统测定血管环张力的变化;激光扫描共聚焦显微镜技术检测血管平滑肌细胞内钙浓度。结果鹿衔草黄酮苷(20 mg·L-1)能够浓度依赖性的降低大鼠离体胸主动脉血管环张力。分别能减小苯肾上腺素(PE) (10-6 mmol·L-1)和KCl(60 mmol/L)对血管环的收缩幅度，最大舒张幅度分别为(102.7±1.6)%(P﹤0.01)和(39.6±1.6)%(P﹤0.01)。此舒张作用不能被一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME 300 mmol·L-1)、鸟苷酸环化酶抑制剂亚甲蓝(MB 10-5mmol·L-1)、环氧酶抑制剂吲哚美辛(Indo 10-5mmol·L-1 )、ATP依赖性钾通道阻断剂格列苯脲(Gli 10-6 mmol·L-1 )、Ca2+依赖性钾通道阻断剂四乙基铵(TEA 10-6 mmol·L-1)所阻断。但可以被瞬时外向钾电流阻断剂氯化钡(BaCl2 10-6 mmol·L-1 )和钾通道阻断剂4-氨基吡啶(4-AP 1 mmol·L-1)阻断。在无钙灌流液中，用HPFG(2 mg·ml-1)孵育10 min可使CaCl2的量效曲线下移且使PE的最大收缩幅度降低(P﹤0.01)。激光扫描共聚焦检测细胞内钙的结果表明，鹿衔草黄酮苷浓度依赖性(1 ，2 g·L-1)地抑制了静息状态平滑肌细胞胞浆内钙浓度的升高。结论鹿衔草黄酮苷能够浓度依赖性舒张大鼠胸主动脉，其作用机制可能是开放瞬时外向钾通道，抑制细胞内钙离子释放和细胞外钙离子内流，但并不影响一氧化氮的释放和前列环素的生成。 【关键词】 鹿衔草黄酮苷; 胸主动脉环; 激光扫描共聚焦显微镜 鹿衔草Herba pyrolae又名鹿蹄草，为鹿蹄草科植物鹿蹄草或普通鹿蹄草的干燥全草，主产于西藏、云南、贵州等地。鹿衔草具有祛风湿、强筋骨、止血的功效，用于风湿痹痛、腰膝无力、月经过多、久咳劳嗽等证。化学研究发现[1]:鹿衔草含有的化学成分主要为黄酮苷类化合物，包括金丝桃苷、槲皮素、2’’-o-没食子酰基金丝桃苷等[2]。有药理实验表明：鹿衔草黄酮苷(Herba Pyrolae Flavonoid glycoside,HPFG)对大鼠急性心肌缺血有保护作用，其机制与抗脂质过氧化有关[3]。其有效单体2’’-o-没食子酰基金丝桃苷对大鼠实验性心肌缺血再灌注损伤有保护作用[4]，同时对豚鼠右心室缺氧再给氧的心肌电活动也有影响[5]，但HPFG对大鼠离体血管的作用及其相关机制未见报道。因此，本实验采用离体大鼠胸主动脉环张力测定和激光共聚焦细胞内钙检测的方法来观察鹿衔草黄酮苷对大鼠离体胸主动脉血管的作用，并对其作用机制进行了探讨。 　　1 材料与仪器 　　1.1 药品与试剂鹿衔草，黑龙江省药材批发市场购得,经本校生药学教研室鉴定;L-N-硝基精氨酸甲酯(NG-nitro-L-arginine-methylester, L-NAME)，4-氨基吡啶(4-aminopyrimide, 4-AP)，四乙基铵(tetrathylamonium，TEA),苯肾上腺素(phenylephrine, PE)，卡巴胆碱(Carbacholine, CCH)，格列苯脲(glybenclamide)，亚甲蓝(methylene blue,MB)，吲哚美辛(indomethacine,Indo) 及乙二醇四醋酸(ethylene glycol tetraacetic acid,EGTA)购自Sigma公司， 其它试剂为国产分析纯。 　　1.2 动物健康Wistar 雄性大鼠,体质量(250 ±20) g ，由哈尔滨医科大学实验动物中心提供。 　　1.3 仪器HV-4血管环灌流系统(成都泰盟科技有限公司);BL-420E生物机能实验系统(成都泰盟科技有限公司);JH-2肌张力换能器(北京航天医学工程研究所);旋转蒸发仪(上海申胜生物技术有限公司);真空干燥箱(上海申胜生物技术有限公司);AL104 型电子天平(上海勒-托利多仪器有限公司);数控恒温浴锅(上海申胜生物技术有限公司)。 　　2 方法 　　2.1 鹿衔草黄酮苷(Herba Pyrolae Flavonoid glycoside,HPFG)的制备 取鹿衔草生药1 kg，20倍量65%乙醇加热回流提取两次，1 h/次，合并提取液，过滤，回收乙醇至无醇味，得到浸膏，加20%乙醇500 ml稀释并搅拌，得到的溶液经石油醚脱脂后，用等体积醋酸乙酯萃取，弃去萃取液，剩余部分用聚酰胺柱层析，20%～95%乙醇作为洗脱液