麦角菌HCB-01712生物合成香草酸甲酯.docVIP

麦角菌HCB?01712生物合成香草酸甲酯 　 【摘要】; 从麦角菌(Claviceps sp.)HCB?01712的发酵液中分离纯化得到化合物HCB?01712?2，经理化分析、紫外吸收、质谱及核磁共振谱分析，确定该化合物为香草酸甲酯。微生物发酵产生香草酸甲酯未见报道。本研究首次从麦角菌发酵代谢产物中发现香草酸酯，有望替代昂贵的植物来源而成为安全的天然绿色产品。 毕业论文 【关键词】; 麦角菌 生物合成 香草酸甲酯 纯化鉴别 毕业论文 ; Methyl vanillate produced by Claviceps HCB?01712 毕业论文 ; ABSTRACT; The compound HCB?01712?2 has been isolated from the broth of Claviceps HCB?01712, by the analyses of its physico?chemical properties, UV, ESI?MS and NMR spectra data, the structure of HCB?01712?2 has been identified as methyl vanillate. It is the first report of methyl vanillate produced by microorganisms. 毕业论文 ; KEY WORDS; Claviceps Biosynthesis Methyl vanillate Purification and identification 毕业论文 香草酸酯类(如香草酸甲酯及香草酸乙酯)是一类用途十分广泛的香料，不仅可作为香水、护肤护发品、化妆品、理发用品、空气清新剂、止汗露及房屋除臭剂等化工产品的添加剂［1］，还可作为许多食品的调味剂，是食品、烟草、调味品和日化香精的很好定香剂。香草酸甲酯还是合成很多药物和化工产品的原料和前体物质。目前，绝大多数香草酸甲酯来源于化学合成，少量取自植物，香草酸甲酯也是许多葡萄酒的主要挥发性香味成分，是酿酒酵母［2］或其它细菌［3］将葡萄中含有的香草酸甲酯葡萄糖苷类物质水解后释放出来的重要香味成分。本研究从12株不同麦角菌(Claviceps sp.)中分离选育，得到一株麦角菌HCB?01712，它能产生化合物HCB?01712?2，该化合物经紫外、质谱及核磁共振分析，确定其化学结构为香草酸甲酯。微生物发酵生产香草酸甲酯未见报道。本文报道其发酵、分离纯化和结构鉴定。 毕业论文 ; 1; 材料与方法 毕业论文 ; 1.1; 菌种及其制备 毕业论文 ; 菌种; 麦角菌(Claviceps)HCB?01712，上海来益生物药物研发中心提供。 毕业论文 ; 斜面(%); 马铃薯提取物20，葡萄糖2，酵母粉0.15，琼脂2，pH6.0。 毕业论文 ; 种子培养基(%); 蔗糖1.5，柠檬酸三钠0.25，CaCl2·2H2O 0.1，KH2PO4 0.5，MgSO4·7H2O 0.02,酵母粉0.01，NH4NO3 0.2，FeSO4·7H2O 0.0007，ZnSO4·7H2O 0.0006，氨水调pH至6.1。 毕业论文 ; 发酵培养基(%); 蔗糖30，柠檬酸1.5，KH2PO4 0.05，MgSO4·7H2O 0.05， 酵母粉0.01，KCl 0.012，FeSO4·7H2O 0.0007，ZnSO4·7H2O 0.0006，氨水调pH至5.2。 毕业论文 ; 采用二级发酵，将冷冻管接种于斜面培养基，24℃培养4～6d，以孢子悬液形式接种于种子培养基，24℃培养4d，转接于发酵培养基，24℃培养7d。 毕业论文 ; 1.2; 设备与仪器 毕业论文 ; N?1001型旋转蒸发仪由上海爱朗仪器有限公司生产；核磁共振仪Varian?Inova?400；质谱仪Q?Tof micro YAO19；紫外及HPLC使用Agilent公司D和DAD检测器。柱层析硅胶为山东黄海化学试剂厂产品，薄层层析板为Merck公司生产的GF254硅胶板。所用试剂为分析纯。香草酸甲酯标准品为Across公司生产的methyl vanillate(≥99%)。 毕业论文 ; 2; 结果与讨论 毕业论文 ; 2.1; 发酵提取和样品制备 毕业论文 ; 取麦角菌HCB?01712菌丝浸泡液经旋转蒸发仪(N?1001型)浓缩，以丙酮∶石油醚(10∶1)溶解，拌入适量硅胶(200～300目)，干燥后装入已用石油醚∶丙酮(100∶1)预先平衡好的硅胶柱中，用石油醚∶丙酮(10∶1)系统恒定洗脱，