siRNA沉默Annexin1基因对膀胱癌T24细胞顺铂耐药影响.docVIP

siRNA沉默Annexin1基因对膀胱癌T24细胞顺铂耐药影响 　 作者：高琳 杨远航 徐万海 林相国 李建章 杨德君 王晓民 【摘要】 　　目的 观察RNA干扰沉默膜联蛋白1(Annexin1)基因表达技术对膀胱癌T24细胞Annexin1基因表达和顺铂耐药的影响。方法 针对Annexin1基因不同部位设计并化学合成3对不同的靶向小分子干扰RNA(siRNA),脂质体介导瞬时转染膀胱癌T24细胞，转染后应用半定量RTPCR和Western印迹检测Annexin1 mRNA 和蛋白的改变，用MTT法检测沉默Annexin1表达在膀胱癌T24细胞对顺铂敏感性的变化。结果 转染siRNA后膀胱癌T24细胞Annexin1的mRNA和蛋白水平显著下降(P＜0.05），增强细胞对顺铂的敏感性(P＜0.05）。结论 RNA 干扰Annexin1基因后其mRNA 和蛋白水平显著下降，并且增强T24细胞对顺铂的敏感性。 【关键词】 膀胱癌；膜联蛋白1；siRNA；顺铂 【Abstract】 Objective To explore the effects of annexin1 gene silencing by small interfering RNA(siRNA) on bladder cancer cells T24 and the sensitivity change of DDP. Methods Three siRNA targeting three different domains of annexin1 gene were designed, synthesized, and transfected into bladder cancer T24 cells by lipofectamineTM2000. After transfection, expression of annexin1 was detected by RTPCR and Westblotting. The cellular sensitivity to DDP was evaluated by MTT assay. Results Compared with the negative control (siRNANC) groups, transfection of three targeting siRNA in T24 cells decreased the expression of annexin1 mRNA and protein. Annexin1 gene silencing increased the sensitivity of T24 cells to DDP. Conclusions The chemically synthesized specific siRNA targeting annexin1 could effectively reduce the expression of annexin1 gene, increase the sensitivity of T24 cells to DDP. 【Key words】Bladder cancer; Annexin1 ; siRNA; DDP 　　膜联蛋白1(Annexin1)是上皮生长因子（EGFR）激酶的主要底酶，糖皮质激素刺激其产生和活性。Annexin1增强感染局部的凋亡表明它对肿瘤的诊断和治疗有重要意义，因此提出该蛋白质与肿瘤细胞的活性调节相关〔1，2〕。Annexin1与膀胱癌发生、发展密切相关。本研究针对Annexin1基因mRNA序列设计合成与之互补的双链小分子干扰RNA（siRNA），在脂质体介导下转染膀胱癌T24细胞系，观察对Annexin1基因mRNA和蛋白表达及对顺铂敏感性的变化。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 细胞株 　　膀胱癌T24细胞株。 　　1.1.2 主要试剂 　　RNA干扰试剂盒(SilencerTM siRNA Construction Kit)购自美国Ambion公司。阳离子脂质体转染试剂盒LipofectamineTM2000、Trizol、MMLV购自Invitrogen 生命技术公司。RPMI1640、IMDM、胰蛋白酶购自Gibco公司。 　　1.2 方法 　　1.2.1 siRNA的设计及合成 　　根据基因库中Annexin1基因序列（GenBank Accession No.NM000700）和siRNA设计原则，应用Ambion生物公司的设计软件(siRNA Target Finder and Design Tools），自