Smac及Ki67在肝外胆管异型增生组织及癌组织中表达及意义.doc

Smac及Ki67在肝外胆管异型增生组织及癌组织中表达及意义 　【摘要】 目的 探讨Smac和Ki67在肝外胆管癌发生发展中的作用和临床意义。方法 用免疫组化SP法检测27例肝外胆管癌组织、10例异型增生组织和5例正常肝外胆管上皮组织中Smac和Ki67的表达。结果 Smac在正常肝外胆管上皮组织、异型增生组织和癌组织中阳性表达率分别为40%、50%和85.2%，异型增生组织和癌组织中Smac表达差异有统计学意义(P=0.041)。Ki67在正常肝外胆管上皮组织、异型增生组织和癌组织中阳性表达率分别为0、40%和81.5%，正常肝外胆管上皮组织和癌组织中表达差异无统计学意义(P=0.001)，异型增生组织和癌组织中表达差异有统计学意义(P=0.038)。Smac和Ki67在异型增生组织和癌组织的表达呈正相关性(r=0.688,P=0.028)。Smac和Ki67的表达与肝外胆管癌组织病理学特征和临床分期无关。结论 Smac和Ki67参与了肝外胆管癌的发生发展,凋亡和增殖失衡在其过程中起重要作用，Smac和Ki67可能在异型增生向癌的恶性转化阶段起重要作用。 【关键词】 肝外胆管癌;异型增生;Smac;Ki67;免疫组织化学 肝外胆管癌是一种相对少见的疾病，其生长缓慢隐蔽，很难早期发现，往往以梗阻性黄疸为首发症状，手术切除率低，预后很差〔1〕。以往我们的研究表明在肝外胆管癌发生的癌序列中，凋亡相关基因Bcl2和Bax的表达逐渐升高〔2〕; PCNA和Ki67在胆管癌中的表达较原位癌和非瘤组织中表达明显升高〔3〕;Smac是新近发现的凋亡相关基因蛋白，Ki67是一种较可靠的全面反映细胞增殖活性的指标〔4〕。本研究应用免疫组织化学SP法检测Smac和Ki67在肝外胆管癌序列中的表达，探讨凋亡和增殖相关基因与肝外胆管癌的发生发展和临床预后的关系。 　　1 材料与方法 　　1.1 标本 肝外胆管癌手术切除标本27例，包括24例高、中分化腺癌，3例低分化、未分化腺癌。临床分期根据1997年国际抗癌联盟(UICC)TNM分期标准分为Ⅰ+Ⅱ期共13例、Ⅲ+Ⅳ期共14例。10例肝外胆管异型增生组织，均取自癌组织边缘。5例正常肝外胆管上皮组织作为对照。所有标本经10%甲醛固定，石蜡包埋，进行4 μm连续切片10张。标本HE染色后，组织学诊断至少有两名病理医师完成。异型增生组织学诊断依据以下标准〔5〕。 　　1.2 主要试剂 Smac兔抗人多克隆抗体购自Abcam公司。Ki67 鼠抗人单克隆抗体购自福州迈新生物技术公司。过氧化物酶标记的链霉卵白(SP)染色试剂盒，浓缩型二甲基联苯胺(DAB)试剂均为福州迈新生物技术公司产品。 　　1.3 免疫组织化学染色 采用免疫组织化学SP法。具体步骤按试剂盒说明书进行。Smac和Ki67一抗分别以1∶200和1∶80比例稀释。用已知的Smac蛋白阳性的心肌组织和Ki67蛋白阳性的肝癌组织作为对应的阳性对照。以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗做阴性对照。 　　1.4 免疫组化阳性染色指标的判定 Smac阳性染色判定参照童强松等〔6〕的评定标准。Ki67阳性染色判定参照万云乐等〔7〕的评定标准。每张切片观察从阳性染色最强的部位开始，400倍光镜下连续观察5个视野,根据Smac和Ki67阳性细胞所占的百分比分为4个等级：阳性细胞所占百分比lt;5%为阴性(-);阳性细胞所占百分比在6%～25%为弱阳性(+);阳性细胞所占百分比在26%～50%为中等阳性();阳性细胞所占百分比gt;50%为强阳性()。 　　1.5 统计学方法 利用SPSS10.0软件率的比较采用确切概率法和χ2检验。相关性检验采用Spearman等级相关分析。 　　2 结 果 　　2.1 肝外胆管异型增生组织及癌组织中Smac和Ki67表达特征 Ki67在异型增生组织和癌组织中表达，阳性表达表现为胞核棕黄或棕褐着色。Smac在正常胆管上皮组织、异型增生组织和癌组织中均有阳性表达，为胞浆黄色或棕黄色片状或细颗粒状着色，见图1。 　　2.2 正常肝外胆管上皮组织、异型增生组织和癌组织中Smac和Ki67表达 Smac三种组织中表达差异显著(Plt;0.05)。异型增生组织和癌组织中表达差异显著(Plt;0.05)，正常肝外胆管上皮组织和异型组织中表达差异显著(Pgt;0.05)，正常肝外胆管上皮组织和癌组织中表达差异不显著(Pgt;0.05)。Ki67在三组中表达差异显著(Plt;0.05)。正常肝外胆管上皮组织和异型增生组织中表达差异不显著(Pgt;0.05)，正常肝外胆管上皮组织和癌组织中表达差异显著(Plt;0.05),异型增生组织和癌组织中表达差异显著(Plt;0.05)，见图1。 　　图1 S