串联重复核定位信号绿色荧光蛋白融合载体构建及原核表达.docVIP

串联重复核定位信号绿色荧光蛋白融合载体构建及原核表达 　【摘要】 　　目的： 构建绿色荧光蛋白-串联重复核定位信号融合蛋白的表达载体（HisEGFP3xNLS），并在原核细胞中进行表达与纯化。方法： 采用PCR方法从原先克隆在pEGFPC1载体中的3xNLS与EGFP编码序列扩增出来，使用常规酶切和连接方法将其重组至pET14b载体中，对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定。转化BL21(DE3)大肠杆菌株，用IPTG诱导融合蛋白表达，并利用NiNTA亲和层析纯化该融合蛋白。结果： 构建的HisEGFP3xNLS融合蛋白表达载体是正确的，该载体可在大肠杆菌内高效表达，用NiNTA纯化获得了相对分子质量约36 kD的融合蛋白。结论： 成功构建了HisEGFP3xNLS融合蛋白表达载体，并在原核细胞中获得了高效表达和纯化，为进一步研究NLS介导信号分子入核提供了实验材料。 【关键词】 核定位信号 载体蛋白质类 基因表达 蛋白纯化 　　［Abstract］ Objective: To construct the expression vector of HisEGFP3xNLS fusion protein and obtain its expression and purification in E. coli. Methods： 3xNLS and EGFP