丝裂霉素对人胃癌细胞谷胱甘肽转移酶表达影响.docVIP

丝裂霉素对人胃癌细胞谷胱甘肽转移酶表达影响 　 作者：李海峰 程琳 乔振江 常宝 　【摘要】 目的：探讨丝裂霉素对胃癌细胞谷胱甘肽转移酶（Glutathione Strans ferase,GSTπ）表达的影响。方法：利用人胃癌细胞株BGC823进行培养，加入丝裂霉素后5h和10h后采集细胞，进行免疫组化染色。结果：5h组，胞质中GSTπ含量下降，胞核中GSTπ增多；10h组其胞质与胞核中仍有少量GSTπ表达。结论：丝裂霉素对BGC823癌细胞有明显的杀伤作用，其途径之一可能与抑制GSTπ基因表达有关。 　　【关键词】 丝裂霉素；胃癌；谷胱甘肽转移酶；免疫组织化学 　　【ABSTRACT】 Objective：To study the killing function of mitomycin on gastric cancer cells and the expression of GSTπ . Methods: As human gastric cancer cells were cultured, mitomycin were injected to culture continuously for 5h or 10h. The gastric cancer cells were observed under optical microscope and transmission electron microscope after staining with immunohistochemical method.Results: The morphology of gastric cancer cell was not changed significantly, but content of GSTπ decreased in the 5 hours group in the group. The changes in the 10 hours group were as follows: the cell organ were obviously destroyed, the cell membrane were burst, the expression of GSTπ was little in cytoplasm and nuclear. Conclusion:Mitomyclin has a killing fuction to gastric cancer cells, one of manners was related to restraining the expression of GSTπ gene. 　　【KEY WORDS】 Mitomycin;Gastric cancer;GSTπ;Immunohistochemical method 化学治疗是对恶性肿瘤综合性治疗的一部分，丝裂霉素是临床常用的抗癌药之一，其作用效果临床已有报告，而对其作用途径，尤其是它对重要酶系的影响，尚未见报告。本实验采用细胞培养技术和免疫组织化学技术，观察丝裂霉素（Mitomycin,MMC）对胃癌细胞谷胱甘肽转移酶（胎盘型，简称GSTπ）的影响，为探讨丝裂霉素的抗癌机制提供科学依据。 　　1 材料和方法 　　11 材料 丝裂霉素注射液（Mitomycin for injection）由浙江省海正药业股份有限公司生产（批号040901）。BGC823胃癌细胞株由北京肿瘤研究所提供；二氧化碳培养箱和RPMI1640培养液由实验中心提供。兔抗人GSTπ抗血清及SP试剂盒由北京中山生物技术公司提供。 　　12 方法 将5×104浓度的BCG823细胞接种于无菌96孔板和6孔板中，培养24h。在6孔板中加入无菌盖玻片，使癌细胞附壁生长（爬片）。对照组不加入药物，实验5h组，即加入MMC15μl(00075mg),培养5h后收获，实验10h组则加药后培养10h。然后将培养液中细胞离心，25%戊二醛前固定。将附壁爬片的癌细胞培养液中分别加药5h、10h后取出盖片，用4%多聚甲醛固定，常规洗涤和SP免疫组织化学染色。其操作程序按试剂盒说明书进行。阴性对照PBS代替Ⅰ抗，阳性对照为已知人胃癌组织切片。 　　13 统计学处理 利用彩色图象分析仪软件进行图象分析。每组随机计数100个癌细胞，以灰度表示着色深浅（深者灰度值低，浅者灰度值高）。借助SPSS软件进行方差分析，然后进行独立样本t检验。 　　2 结果 　　免疫组化染色，GSTπ阳性物质呈棕黄色或黄色，分布在癌细胞质或少数细胞的核与质中，用药5h组胞核与胞质阳性物质均减少（见表1），其灰度升高（表示着色浅），并与对照组有显著性差异（Plt;001）。10h组生存细胞减少，只有生命力强