善胃Ⅱ号方对大鼠胃癌前病变抑制作用及其机制探究.docVIP

善胃Ⅱ号方对大鼠胃癌前病变抑制作用及其机制探究 　 作者：唐丽明，高世全，施伟东，李东华，袁红霞 【摘要】 目的研究善胃Ⅱ号方对胃癌前病变模型大鼠胃黏膜P16、rasP21蛋白的影响及其对胃黏膜病理组织学改变的影响。方法制备胃癌前病变大鼠模型（造模30周）。将130只雄性Wistar大鼠随机均分为4组，即空白组（20只）、模型组（30只）、西药组（40只）、中药组（40只）。除空白组外，其余各组大鼠制作胃癌前病变模型。造模30周后，空白组和模型组每日给予生理盐水灌胃，中药组和西药组大鼠分别给予善胃Ⅱ号方或维酶素灌胃6周，处死大鼠并取材。光镜下观察各组大鼠胃黏膜病理组织学改变；免疫组化法检测胃黏膜组织P16、rasP21蛋白表达水平。结果胃癌前病变模型大鼠胃黏膜P16表达显著降低、rasP21蛋白表达显著增高；中药组与模型组比较，P16显著增高；西药组与中药组比较，P16蛋白表达差异有统计学意义，rasP21蛋白表达差异无统计学意义。结论善胃Ⅱ号方可阻断胃癌前病变模型大鼠胃黏膜的腺体进一步肠化与异型增生。升高P16蛋白的表达、降低rasP21蛋白表达可能是其有效防治胃癌前病变的机制之一。 【关键词】 善胃Ⅱ号方；胃癌前病变；P16；rasP21 　胃黏膜细胞癌变过程中存在多基因的变化及积累，是一个多基因多步骤渐进的过程。与其它恶性肿瘤一样，胃黏膜上皮细胞的癌变是一个渐进过程，常经历多年的持续胃癌癌前病变阶段，因此如何有效治疗和逆转胃癌前病变，是预防胃癌发生的重要途径。善胃系列方剂以中医理论为基础，依照中医方剂配伍的基本原则，针对胃癌前病变的主要病机，分别以活血解毒、养阴清热和益气养阴为主法，针对疾病不同的演变过程及证候情况施以不同的治疗法则，在临床实践中已取得了良好效果［1～4］。本研究旨在利用大鼠胃癌前病变模型，探讨善胃Ⅱ号方对胃癌前病变的治疗机理。 　　1 材料与仪器 　　1.1 动物健康SPF级Wistar雄性大鼠130只，体质量（250±15）g，由卫生部生物制品检定所动物中心提供。 　　1.2 试剂与仪器N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)为FlukA公司产品； P16、rasP21单克隆抗体均为美国Santa cruz公司产品；兔SP检测试剂盒、DAB显色试剂盒、多聚赖氨酸均由北京中杉金桥生物技术有限公司提供；维酶素片为北海阳光药业有限公司产品（批号050224）。高速离心机 HitachiHimac1R21型日本产品；电热恒温水浴箱 HH.W21.Cu600型，上海产；光学显微镜 OlympusBX60型，日本产品；轮转式组织切片机，莱佧2135型，德国。 　　1.3 中药制剂善胃Ⅱ号方由天花粉20 g，玉竹15 g，沙参15 g，麦冬30 g，赤芍15 g等药味组成，由天津市南开医院研究所制成每毫升含1 g生药的水煎液。 　　2 方法 　　2.1 动物分组将130只Wistar雄性大鼠随机分为4组，即空白组20只，模型组30只，中药组40只，西药组40只，除空白组对照外，其余三组进行造模，造模结束后，在相同条件下分笼饲养。 　　2.2 动物模型的建立给予大鼠100 μg/ml的MNNG溶液灌胃，药量为20 ml/kg，隔天1次，灌胃4周后，除自由饮用100μg/ml MNNG溶液30周外（每天更换），同时每只大鼠每3天给予1 ml无水乙醇1次,每进食2 d禁食1 d，进食当天下午自由饮用20 mmol/L(0.85%)脱氧胆酸钠溶液。每周用钳子夹住大鼠尾部一次，使之保持激怒、争夺状态，持续10 min，持续30周。空白对照组10只，每天自由饮用自来水。上述各组均以混合饲料喂养30周。 　　2.3 治疗方法在造模30周结束后，中药组用1 g/ml的善胃Ⅱ号方水煎液以17.1 ml/kg的药量灌胃，1次/d；西药组将维酶素片研碎制成0.029 g/ml的混悬液以17.1 ml/kg灌胃，1次/d；两用药组用药时间均为6周。模型组和空白组以17.1 ml/kg生理盐水灌胃，1次/d；持续时间均为6周。 　　2.4 标本采集及病理组织学、免疫组化染色上述各组于第30周予10％水合氯醛(3 ml/kg腹腔注射)麻醉后处死动物，暴露并游离胃将胃沿胃大弯切开，按照胃底、胃体、小弯、幽门、贲门处分别取材,4%中性甲醛固定，石蜡包埋,切片厚4 ～……6 μm，HE染色，镜下观察病理形态学改变。另外行P16、rasP21免疫组化检测。 　　2.5 病理组织评分 　　2.5.1 病理组织学判断标准以出现胃黏膜上皮异型增生，肠上皮化生判断为胃癌前病变，诊断标准如下：(1)肠上皮化生：胃黏膜上皮细胞可见肠上皮的杯状细胞。(2)轻度上皮异型增生：鳞状上皮增厚，有一定异形性，基底膜完整，腺体明显增多，腺腔扩大，腺细胞核亦增多，异形