彝药野坝子花总黄酮提取及对活性氧自由基清除作用.docVIP

彝药野坝子花总黄酮提取及对活性氧自由基清除作用 　 作者：文美琼，李璐，杨申明，杨永梅，杨玉良 【摘要】 目的研究野坝子花中总黄酮的提取及其对活性氧自由基的清除作用。方法采用醇提酸沉法提取野坝子花中总黄酮，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用分光光度法测定黄酮含量，用总黄酮对活性氧自由基清除作用进行实验。结果样品中总黄酮含量为C=0.235 2 mg/ml，对·OH和O-2·的清除率分别可达30.85%和44.52%。结论野坝子花中黄酮类物质对·OH和O-2·有较好的清除能力。 【关键词】 野坝子花； 总黄酮； 羟自由基； 超氧阴离子自由基 　黄酮类化合物(flavonoids)是一类重要的广泛存在于自然界的天然有机化合物，是目前备受关注的天然产物之一，在植物体中通常以游离或与糖形成苷的形式存在。黄酮类化合物作为一种功能成分，具有许多有益的生物学活性［1,2］，其中重要的生物学活性之一是减少自由基形成、消除自由基的抗氧化活性。 　　野坝子Elsholtzia rugulosa是唇形科香薷属植物，是云南楚雄彝族人民的常用植物药之一，它是一种药食同源的植物，广泛分布于云南各地。野坝子是汉药名，在各地叫法不一，又名野坝蒿、野巴子、野拔子、野香苏、野苏草、夸巴脂、小铁苏、扫把茶、草拔子、草芝麻蒿、皱叶香薷等，其彝药名为阿能抛，始载于《中国彝药学》，全草均可入药，在《全国中药汇编》中记载了其药效。 　　现今，有学者对野坝子进行了红外光谱分析［3］、化学成分分析［4］等研究工作，而对其中黄酮类化合物抗氧化性的研究尚未见报道。本文对野坝子花中总黄酮进行提取、鉴定，并研究其总黄酮对羟自由基（·OH）及超氧阴离子自由基（ O-2· ）的清除作用。 　　1 材料与仪器 　　1.1 材料野坝子花采自云南楚雄市西山公园，经楚雄师范学院化学与生命科学系徐成东博士鉴定为唇形科香薷属植物野坝子花。 　　1.2 试剂芦丁（日本和光纯药工业株式会社）；无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、硫酸亚铁、水杨酸、双氧水、盐酸、锌粉均为国产分析纯；水为实验室自制超纯水。 　　1.3 仪器754型紫外可见分光光度计（上海第三分析仪器厂制造），HH-S2型恒温水浴锅（金坛市大地自动化仪器），CP214C电子天平（奥豪斯仪器有限公司制造），SHZ-IIIA型循环水式真空泵（巩义市英峪予化仪器厂）等。 　　2 方法与结果 　　2.1 总黄酮成分提取准确称取一定质量的野坝子花干粉，用50%的乙醇预浸18 h，于80℃回流提取3h（共2次），提取液浓缩后，加盐酸调节pH值至3～4，使黄酮类化合物沉淀，沉淀以50%的乙醇溶解并定容于250 ml容量瓶得样品液。 　　2.2 总黄酮成分的鉴别［5,6］取样品液1 ml于试管中，分别加入以下试剂，结果见表1。表1 黄酮类化合物的定性鉴定（略） 　　由表1可以说明，野坝子花的提取物是黄酮类化合物。 　　2.3 总黄酮含量测定 　　2.3.1 测定方法依据以芦丁为对照品测定野坝子花中黄酮类化合物的含量，加入铝离子试剂，在碱性条件下使黄酮类化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。 　　2.3.2 测定波长选择准确吸取1.00 ml的样品液于25 ml比色管中，加5%亚硝酸钠溶液1.00 ml；10%硝酸铝溶液1.00 ml；4%氢氧化钠溶液10.00 ml，再加50%乙醇至刻度。以试剂空白作参比，在400～……700 nm之间测定络合物吸光度,络合物在510 nm处有最大吸收，故测定时选用此波长。 　　2.3.3 标准曲线的绘制准确吸取0.200 mg/ml的芦丁对照品溶液0.00，2.00 ，4.00，6.00，8.00，10.00 ml分别置于25 ml比色管中，各加5%亚硝酸钠溶液1.00 ml，混匀，放置6 min；加10%硝酸铝溶液1.00 ml，混匀，放置6 min；加4%氢氧化钠溶液10.00 ml，再加50%乙醇至刻度，摇匀，放置10 min。在510 nm波长处以试剂空白为参比测定吸光度，绘制标准曲线，得回归方程为A=0.011 35C-0.026 48，r=0.999 5。所得标准曲线见图1。 　　2.3.4 提取液总黄酮含量的测定精密量取样品溶液1.00 ml，置于25 ml比色管中，按标准曲线的绘制项中操作方法显色后，测定出试液吸光度，根据回归方程，计算出原样品溶液总黄酮的含量为C=0.235 2 mg/ml。 　　　2.4 总黄酮提取物对羟自由基（·OH）清除作用［7］参照Fenton反应的方法建立反应体系模型。利用H2O2与Fe2+混合后产生存活时间短，具有很高反应活性的·OH这一性质，在反应体系中加入水杨酸后，就能有效地捕捉·OH，并产生有色产物，该产物在510 nm处有强吸收。若加