平喘Ⅰ号对呼吸道合胞病毒哮喘小鼠IL10、IL12影响.docVIP

平喘Ⅰ号对呼吸道合胞病毒哮喘小鼠IL10、IL12影响 　作者：杨季国 窦胜冬 徐燕立 林馨 程东庆 冯立 【摘要】 目的］观察平喘Ⅰ号对呼吸道合胞病毒（RSV）感染引起BALB/c小鼠哮喘模型血清中细胞因子IL10、IL12水平的影响及其抑制气道炎症反应的作用，探讨平喘Ⅰ号治疗哮喘发作的作用机制。［方法］70只BALB/c小鼠随机分成7组，正常对照组、模型对照组、利巴韦林组、急支糖浆组、平喘Ⅰ号低、中、高剂量组，每组10只。予RSV致敏，除正常对照组和模型对照组用等量生理盐水外，其余各组用相应药物干预。末次激发48h后取肺部标本行常规病理观察，并取血清采用ELISA法测定各组IL10、IL12的表达水平。［结果］平喘I号各剂量组较利巴韦林组和急支糖浆组IL10、IL12表达水平均有明显升高(P＜0.05）。其中以平喘I号高剂量组升高最为突出。高剂量组较中剂量组和低剂量组对IL10和IL12的调节作用更为显著(P＜0.01）。同时，平喘Ⅰ号能明显减少气道浆细胞和嗜酸性粒细胞（EOS）等炎症细胞的浸润。［结论］平喘Ⅰ号能提高哮喘小鼠IL10、IL12的表达，抑制支气管哮喘气道炎症，并具有量效关系，由此推测，这种对抗炎因子表达的正性作用是治疗哮喘的作用机制之一。 【关键词】 呼吸道合胞病毒；支气管哮喘；平喘Ⅰ号；IL10；IL12 　　平喘Ⅰ号是临床治疗哮喘急性发作的经验方，该方从中医的“伏痰”理论论治哮喘，以清肺化痰，降逆平喘为治则，通过长期的临床治疗和观察，对哮喘急性发作有明显的控制作用。我们的前期研究发现，该药物确能缓解哮喘症状，并有效控制气道炎症。在此基础上，我们进一步观察平喘Ⅰ号治疗哮喘的效果，观察其对呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus，RSV）哮喘小鼠IL10、IL12表达的影响，以期从多环节、多靶点、多方位探讨平喘Ⅰ号治疗RSV哮喘的作用机制，为中医药防治RSV哮喘提供有力的实验和理论依据。1 材料与方法　　1.1 动物及分组 4～6周龄雌性BALB/C小鼠70只，体重14±2g，由浙江中医药大学动物实验中心提供。将小鼠随机分成正常对照组、模型对照组、利巴韦林组、急支糖浆组、平喘Ι号低、中和高剂量组7组，每组10只。 　　1.2 实验药物 （1）平喘Ⅰ号煎剂。药物组成：旋覆花10g，代赭石20g，葶苈子10g，苏子10g，白芥子10g，炒黄芩10g，竹沥半夏10g，地龙10g，杠板归10g。处方药物由浙江中医药大学第二门诊部中药房提供。所有药物经浸泡、煎熬、过滤及浓缩成浓度为4g/ml生药含量的药汁。（2）利巴韦林颗粒剂（四川百利药业有限责任公司生产）50mg×18袋，用生理盐水配成7.5mg/ml的溶液。（3）急支糖浆，100ml/瓶（太极集团涪陵制药厂生产）。 　　1.3 主要试剂 （1）福尔马林灭活的呼吸道合胞病毒(FIRSV)。RSV病毒由浙江省疾病预防控制中心提供，接种于Hep2细胞上，至病变达到时收集病毒，福尔马林溶液灭活的RSV病毒。（2）IL10、IL12酶联免疫吸附试验（ELISA）所有试剂盒均购于德国eBioscience。（3）氢氧化铝溶液取5％硫酸铝溶液250ml，在强烈的搅拌下加入5％氢氧化钠100ml，用生理盐水离心洗沉淀2次，再悬入生理盐水中使达250ml［8］。同时取适量加等容积抗原（蛋白质含量25mg/ml）。 　　1.4 造模及给药 除正常组外的各组小鼠以0.1ml致敏液（FIRSV和AL(OH)3佐剂1：1）腹腔注射致敏，第8天再次致敏，第21天小鼠经戊巴比妥麻醉后用FIRSV液滴鼻激发哮喘。正常组以等量生理盐水代替FIRSV。第8天致敏后，平喘Ι号低、中、高剂量组分别以20g、40g、80g/kg/d灌胃；利巴韦林对照组给予75mg/（kg·d）灌胃，急支糖浆对照组给予15ml/kg/d灌胃，正常组及模型组均给予等容量的生理盐水灌胃。每日1次，连续给药14天。 　　1.5 血清IL10、IL12含量测定。末次激发24小时后，摘小鼠眼球取血0.4ml左右，室温静置1～2h，以2500r/min离心15min，取0.1ml血清分装于无热源和内毒素的塑料试管中，封口后保存在-80℃冰箱中，待测IL10、IL12。按ELISA操作说明书上的检测步骤进行IL10、IL12含量的测定。 　　1.6 肺组织病理学观察。各组小鼠于末次激发24小时后依次处死小鼠，行胸腔切开，剪取每只小鼠左肺，浸泡于4％福尔马林溶液中固定，常规脱水，石蜡包埋切片，HE染色，采用德国LeicaQ500MC图像分析系统，观察支气管黏膜嗜酸性粒细胞（EOS）浸润、水肿和上皮损伤程度。 　　1.7 统计方法 实验数据用SPS