平阳霉素微球长效制剂制备及其体内外释放.docVIP

平阳霉素微球长效制剂制备及其体内外释放 　【摘要】 目的 制备可稳定释药平阳霉素的长效微球制剂，考察该微球制剂在体内外的释放。方法 运用复乳溶剂挥发法，以聚乳酸羟基乙酸（PLGA）共聚物为囊材，将平阳霉素包封在PLGA微球中，制备可缓释的具有较高包封率的平阳霉素PLGA微球长效制剂。将该微球制剂在体外环境和比格犬体内做药物释放试验。结果 体外释放实验证明该微球制剂可持续释放平阳霉素近28 d，将其肌肉注射到比格犬体内，可稳定缓释平阳霉素近24 d。结论 平阳霉素PLGA微球制剂制备工艺合理，肌肉注射该微球制剂在体内有缓释平阳霉素的作用。 【关键词】 平阳霉素；聚乳酸羟基乙酸(PLGA)；微球；体外释放；体内释放 平阳霉素目前主要应用在治疗老年人易发的恶性肿瘤中且疗效显著〔1,2〕。一些良性肿瘤和良性病变，如淋巴管瘤、血管瘤、眼科翼状胬肉、皮肤尖锐湿疣和白癜风、鼻息肉等在应用平阳霉素治疗时均见到令人满意的疗效〔3〕。平阳霉素的应用由于受限于半衰期短，给药方式局限性大，在中国的临床应用主要围绕在原位给药，使得平阳霉素的抗肿瘤特性没有得到很好的应用。治疗时需连续注射给药给患者增添了麻烦，尤其是老年患者更加难以承受连续注射带来的痛苦。聚乳酸羟基乙酸（PLGA）共聚物是一种药物制剂制备中常用的药用辅料，该材料具有缓释释放降解的性质，目前已被美国FDA批准用于各种药物制剂的制备和作为医用材料〔4〕。本研究拟运用PLGA包裹平阳霉素制备成PLGA微球制剂，以有效地解决平阳霉素生物半衰期短的问题。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物及药品、试剂与仪器 　　2岁龄比格犬6只，雌雄各半,体重12.5～14 kg，吉林天药科技有限公司动物中心提供。平阳霉素注射剂（中国哈尔滨博莱制药有限公司），PLGA（美国lakeshore公司），PVA（美国Sigma公司），二氯甲烷（中国天津试剂厂），API4000质谱仪（美国Applied Biosystem公司），KQ300DV台式数控超声仪（上海精密仪器仪表公司）。 　　1.2 平阳霉素PLGA微球的制备 　　将经过预处理的平阳霉素水溶液加至溶有PLGA的二氯甲烷溶液的初乳反应器中，运用均质器在初乳反应器中高速搅拌制备油包水的初乳，再将该初乳缓缓注入聚乙烯醇（PVA）水溶液中。在自制的复乳搅拌反应器中, 600 r/min搅拌形成水包油包水的复乳，然后300 r/min搅拌复乳,其间保持反应器内的气体流通，搅拌3.5 h后即得到固化的平阳霉素PLGA微球。将该微球用蒸馏水反复冲洗，去除掉杂质，用冷冻干燥法干燥后得到平阳霉素PLGA微球制剂〔5〕。 　　1.3 平阳霉素PLGA微球包封率及形态学测定 　　精密称取平阳霉素PLGA微球100 mg放入50 ml容量瓶中，加适量乙腈溶液，待微球全部溶解后，用水定容并超声。取上清液用高效液相法测定上清液平阳霉素浓度，折算包封率。将冻干后的平阳霉素PLGA微球进行粒径检测并通过电镜进行形态学观察。 　　1.4 平阳霉素PLGA微球体外释放的测定 　　精密称取制备好的平阳霉素微球40 mg，置于含25 ml体外释放液的特制试管中并用封口膜密封，放置到37 ℃的恒温摇床中75 r/min振荡,分别于4 h，1，2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，24，28 d取出20 ml上清液，并将上清液离心后取上清液，等待液相检测，同时补充20 ml体外释放液。用高效液相法测定每次时间点取出的上清液中平阳霉素的含量〔6〕，以此测定28 d的累积释放百分率。将平阳霉素微球按照此体外实验步骤重复操作6次，做平阳霉素微球体外平均的释放曲线。 　　1.5 平阳霉素PLGA微球的体内释放 　　将制备好的平阳霉素PLGA微球以臀部肌肉深部注射方式注射到一组比格犬体内，雌雄各半共6只比格犬。在4 h，1，2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，24，28 d时采取血样3 ml，检测血中平阳霉素的浓度。做血药浓度释放曲线图，分析平阳霉素PLGA微球体内释放情况。 　　2 结 果 　　2.1 平阳霉素PLGA微球包封率及形态学 　　平阳霉素PLGA微球制剂呈白色粉末状，无塌陷或萎缩现象，球形致密圆整。平阳霉素PLGA微球制剂平均粒径为3.7 μm，其中微球粒径为300 nm～10 μm，该微球制剂包封率可达65%以上。 　　　2.2 平阳霉素PLGA微球体外释放结果 　　平阳霉素可以在28 d内从微球中完全释放出去，体外释放曲线显示10 d内平均累积释放率超过45%（图1），20 d内的平均累积释放率超过80%。根据平阳霉素普通制剂用药的用法用量，适宜每20 d注射一次，而微球释放的前20 d累积释放率较高，释放了超过总药量的87%，体外释药曲线平稳，适于进行体内释