生物化学 第三章 核酸化学.pptVIP

第三章 　 核酸化学 第一节　概述 第二节　核酸的化学组成 第三节　DNA的结构 第四节　RNA的结构 第五节　核酸及核苷酸的性质 第六节　核酸的分离提取和纯化 第一节 概述 二、核酸的种类、分布和功能 1、脱氧核糖核酸（DNA，Deoxyribonucleic Acid） 5′磷酸核苷酸的基本结构 一、核酸完全水解的产物 核苷酸的结构和命名 常见（脱氧）核苷酸的结构和命名 碱基、核苷、核苷酸的概念和关系  三、稀有组分 腺苷酸及其多磷酸化合物 体内重要的环化核苷酸有3′,5′-环化腺苷酸（cAMP）和3′,5′-环化鸟苷酸（cGMP）。 是重要的调节物质，被称为第二信使。  NAD、NADP、FAD、HSCoA 医疗中，ATP作为能源药物用于心力衰竭急救，cAMP用于心肌梗死，阿拉伯糖胞苷有抗DNA病毒作用，用于抗癌。 在食品发酵中，5′-肌苷酸和5′-鸟苷酸有助鲜作用，强力味精。 天然存在的茶叶碱、可可碱及咖啡碱都是黄嘌呤的甲基衍生物，具有增强心脏活动的功能。 第三节 DNA的分子结构 一、DNA的一级结构 DNA一级结构的表示法 （三）DNA的双螺旋结构稳定因素 三种DNA双螺旋构象比较 三、DNA的三级结构 四、染色体结构 DNA存在形式 真核生物染色体DNA组装不同层次的结构 第四节 RNA的分子结构 一、RNA的一级结构 DNA、RNA的一级结构 原核生物mRNA的结构 真核生物mRNA的结构 帽子的功能： （1）可抵抗5′-核酸外切酶降解mRNA； （2）在蛋白质合成中，有助于核糖体对mRNA的认别和结合，使翻译得以正确起始。 Poly(A)功能 ： （1）与mRNA从细胞核到细胞质的运输有关； （2）提高mRNA在胞质中的稳定性，延长mRNA的寿命。 转运RNA (tRNA) tRNA的功能（主要）： 　在蛋白质合成过程中，转运氨基酸和识别密码子。 酵母tRNA Ala 的二级结构 氨基酸臂：7对碱基组成，3′末端为CCA-OH，－OH 端结合活化的氨基酸。 二氢尿嘧啶环（DHU环）：由8~12个核苷酸，含有二氢尿嘧啶（D）而得名。 反密码环：一般由7~9个核苷酸组成，含反密码子，反密码子与mRNA上的密码子配对，将合适的氨基酸携带到合适的位置。 额外环：位于反密码区与T?C区之间，不同的tRNA该区变化较大。 T?C环：含有胸苷（T）、假尿苷（?） 　　　　　和胞苷（C），故名T?C。 tRNA的三级结构 第五节 核酸及核苷酸的性质 一、一般物理性质 二、紫外吸收性质 三、核酸和核苷酸的两性解离 四、核酸的变性、复性和分子杂交 五、核酸的显色反应 一、一般物理性质 1. DNA白色絮状固体，RNA白色粉末状固体，都溶于水，不溶于乙醇，因此常用乙醇来沉淀； 2. DNA溶液黏度大于RNA溶液； 3. DNA难溶于0.14mol/L的NaCl溶液，可溶于1~2 mol/L的NaCl溶液，RNA则相反，可据此分离二者。 二、紫外吸收 嘌呤碱和嘧啶碱都含有共轭双键体系，所以核苷、核苷酸、DNA、RNA在240~290 nm有吸收； 最大吸收峰为260nm，可用于核酸的定性和定量测定； 不同碱基的紫外吸收特性不同。 三、两性解离 核酸和核苷酸含酸性的磷酸基团，又含弱碱性的碱基，为两性电解质，可发生两性解离； 等电点偏酸性，DNA的pI约为4～5，RNA的pI约为2.0～2.5，在pH7～8电泳时泳向正极； 尿嘧啶和胸腺嘧啶不能进行碱性解离； 利用两性解离特性和等电点，可以来分离、纯化、制备核酸。 DNA的变性过程 Tm：熔解温度（melting temperature） （三）分子杂交（hybridization） 　　　来源不同的DNA，若彼此间有部分互补的核苷酸顺序，在同一溶液中进行热变性和退火处理后，形成新的杂种双螺旋，这一现象称为核酸的分子杂交。 分子杂交的原理示意图 核酸的变性、复性和杂交 Southern印迹法 分子杂交的种类 Southern Blot：DNA-DNA杂交 Northern Blot：DNA-RNA杂交 Western Blot：抗原-抗体进行杂交 五、核酸的显色反应 1.核糖的地衣酚（ 甲基间苯二酚）反应 核酸的显色反应 3. 核酸中磷酸的定量检测 　　　　　　　　　　　 钼蓝反应 二、核酸的纯化 1.超速离心 　　溴化乙淀－氯化铯密度梯度离心 2.凝胶电泳 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 3.柱层析 1. 试比较核酸、蛋白质一级结构的异同，写出各自基本结构单位的通式 。 腺嘌呤 鸟嘌呤 胞嘧啶 胸腺嘧啶 尿嘧啶 根据A260/A280的比值判断核酸样品的纯度 纯DNA：A260/A280=1.8 纯