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1105 非无菌产品微生物检验方法 适用性试验 为什么要做方法适用性试验？ n 与国际通用要求接轨 n 促进微生物检验定量化 n 推进微生物检验标准化 n 提升药品质量的要求 培养基适用性检查 n 范围： - 成品培养基 （新引入概念） - 由脱水培养基制成的培养基 - 按处方配制的培养基 计数方法适用性试验： n 实质：微生物计数方法验证。 n 几个数字要求： - 接种菌悬液的体积不大于供试液的1% - 菌悬液含菌量不大于100cfu - 抗菌或抑菌活性的标准：回收率低于50% 微生物测试方法 n 平皿法 1、倾注发； 2、涂布法 n 薄膜过滤法 n MPN法 涂布法 n 新引入的方法 n 关键点：涂布供试液不少于0.1mL. 非无菌产品微生物限度检查： 控制菌检查法 培养基适用性检查 n 培养基促生长能力检查 分离培养基在规定的最短时间内促生长能力考察。 n 培养基抑菌能力检查 分离培养基在规定的最长时间内的抑菌能力考察。 检验方法适用性试验 n 实质：控制菌检验方法验证。 n 适用性试验： 规定最短时间培养，试验菌检出能力试验。 供试品检查 n 规定最长时间下的控制菌试验。 验证 目的 n - 在于确认 （寻找）一种有效的检验方法， 如果样品 （药品）中有一定数量的微生物 存在，那么采用此法可以使得样品 （药品 ）中的微生物得以检出。 n - 充分验证样品 （药品）本身对微生物生长 的影响。 方法适用性试验的目的 n 确认一种检验方法。 验证实验 检验条件 检验方法 样品量 稀释液种类 稀释液体积 检验规程 中和剂 SOP 培养基 培养时间 培养温度 …… 影响微生物检验的因素 n 微生物检验的检出率很低下 n 样品/药品自身的特殊性 n 样品/药品中添加的防腐剂/抑菌剂 n 培养基的特性 n 培养条件 n 人员因素 n 实验器材的选择 恢复试验 n 微生物方法适用性试验的实质就是评价 和考察微生物恢复试验 （恢复生长）的 可信度。 n 恢复试验就是确认某一检验方法，它可 以使加入其中的各种微生物都能够恢复 生长。 方法适用性试验内容 （一）计数法适用性试验 （二）控制菌检验法适用性试验 微生物检验法适用性试验 （一） 计数法适用性试验 供试液制备 n 表面活性剂、中和剂或灭活剂：应证明其有效 性及对微生物的生长和存活无影响。 n 供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过 1小时。 n 供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过 45℃。 n 供试液的体积：100ml 。 稀释剂： （1）0.1%无菌蛋白胨水溶液 （2 ）pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 （3 ）0.9%无菌氯化钠溶液 n 固体：10g 供试品+稀释剂至100ml n 液体：10ml供试品+稀释剂至100ml 计数法适用性检查菌种选择原则 n 普遍性 - G+ 、 G-、 -杆菌 （长、短杆菌） -球菌 -真菌 （丝状真菌、酵母菌）