霉菌酵母菌检测.pptVIP

微生物检验的意义 微生物检验是衡量食品和药品卫生质量的重要指标之一，是判定被检食品或药品能否食用或药用的科学依据之一。 是判断食品和药品加工原料、生产环境卫生情况及对成品被污染的程度作出正确的评价，为卫生管理工作提供科学依据。 微生物检验贯彻“预防为主”的卫生方针，有效的防止或减少食物中、药品毒害、人兽共患病的发生。保障人民身体健康。 提高产品质量，避免经济损失。 一.菌落总数测定 菌落总数是指在被检样品的单位重量（g）、容积（ml）或表面积（cm2）内，所含能于某种固体培养基上，在一定条件下培养后所生成的菌落的总数，以 CFU/g（mL）来表示。一定条件包括培养基成分、培养温度和时间、pH、是否需要氧气等 菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。 食品中细菌菌落总数越多，则食品含有致病菌的可能性越大，食品质量越差；菌落总数越小，则食品含有致病菌的可能性越小。须配合大肠菌群和致病菌的检验，才能对食品做出较全面的评价。 一、? 实验目的 1、??学习并掌握食品中菌落总数测定方法和原理。 2、掌握平板菌落计数法及熟悉无菌操作技术。 3、了解菌落总数测定在对被样品进行卫生学评价中的意义 。 菌落总数测定 器材与试剂： 检样，无菌蒸馏水，平板计数培养基，1ml吸管，10ml吸管，无菌培养皿（17），镊子，试管（4），均质杯，剪刀，移液枪，报纸，量筒，烧杯，酒精灯，天平电炉、恒温培养箱、恒温水浴箱等。 三、流程 1、检样 2、10倍系列稀释 3、5个适宜稀释度各1 mL,分别加入无菌平皿内 4、平皿内倾注15～20 mL琼脂培养基，混匀 5、36 ±1℃培养48±2小时或（24±2）小时 6、记录稀释倍数和相应的各平板菌落数量 7、 计算菌落总数 → 报告 四、??步骤 (一)?????取样、稀释和培养 1、?以无菌操作取检样25g于225ml无菌水一起进入无菌均质杯内8000~10000r/min均质1~2min， 制成1：10的均匀稀释液。 2、用1 mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1 mL，沿管壁徐徐注入含有9 mL灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液的试管内，振摇试管或反复吹打混合均匀，制成 1：100的稀释液 3?、另取1 mL灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1 mL吸管。 4、根据标准要求或对污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在制作10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。 同时分别取1ml稀释液（不含样品）加入两个灭菌平皿内作空白对照。 5?、稀释液移入平皿后，将冷却至46℃琼脂培养基注入平皿约15～20ml，并转动平皿，混合均匀。 6、?待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h （二）?菌落计数  做平板菌落数记录时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落总数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数。 到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于0～4℃，但不要超过24h。 1、?平皿菌落数的选择  （1） 选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。每一个稀释度应采用两个平皿，大于300的可记为多不可计。 （2）其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，则可以计算半个平板后乘以2，以代表一个平板的菌落数。 （3）当平板上有链状菌落生长时，如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限，则应作为一个菌落计，如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算，不要把链上生长的每一个菌落分开计数。 （三）结果与报告 1、菌落总数的计算方法 （1）若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）中菌落总数结果。 （2）若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按如下公式计算：N=∑C/（n1+0.1n2）d…………（1 ) 式中：N ― 样品中菌落数；∑C ― 平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；nl ― 第一个适宜稀释度平板数；n2 ― 第二个适宜稀释度平板数；d ― 稀释因子（第一稀释度）。 （3）、?若所有稀释度的平板菌落数均300，则取最高稀释度的平均菌落数