第六章 仪器分析 荧光分析法.ppt

第6章 荧光分析法 主要内容 概 述 荧光分析法特点：灵敏度高，比UV-Vis的灵敏度高得多；选择性好；应用不广泛，主要是因为能发荧光的物质不具普遍性。 概 述 概 述 概 述 ① 强紫外-可见吸收 ② 一定的荧光效率 π→π*跃迁 强吸收带 n →π*跃迁 弱吸收带 存在共轭的π→π*跃迁， ?f高，荧光强度大。 (1)灵敏度校正 ? (2)波长校正 (3)激发光谱和荧光光谱的校正 Thank You ！ ① 共轭效应 提高共轭度利于增加荧光效率并产生红移。绝大多数能产生荧光的物质都含有芳香环或杂环，因为芳香环或杂环分子具有长共轭的π→π*跃迁。π电子共轭程度越大，荧光强度（荧光效率）越大，而荧光波长也长移。 （2）影响荧光强度的结构因素 1.基本原理 ② 分子的刚性与共平面性 在同样的长共轭分子中，分子的刚性和共平面性越大，荧光率越大，并且荧光波长产生长移。 多数具有刚性平面结构的有机分子具有强烈的荧光。因为这种结构可以减少分子的振动，使分子与溶剂或其它溶质分子的相互作用减少，也就减少了碰撞去活的可能性。 1.基本原理 1.基本原理 ③ 取代基效应 取代基的性质对荧光体的荧光特性和强度均有强烈影响。苯环上的取代基会引起最大吸收波长的位移及相应荧光峰的改变。 通常给电子基团，如-NH2、-OH、-OCH3、 -NHCH3 和-N(CH3)2 等，使荧光增强。因为产生了p-?共轭作用，增强了?电子共轭程度，使最低激发单重态与基态之间的跃迁几率增大。 吸电子基团，如－Cl、－Br、－I、-NHCOCH3、－NO2 和－COOH，使荧光减弱。具有刚性结构的分子容易产生荧光。 1.基本原理 （3）影响荧光强度的外部因素 ① 温度 温度升高，荧光物质的荧光效率和荧光强度下降。 其中一个原因是分子的内部能量转化作用。当激发分子接受额外热能时，有可能使激发能转换为基态的振动能量，随后迅速振动弛豫而丧失振动能量。另一个原因是碰撞频率增加，使外转换的去活几率增加。 1.基本原理 溶剂极性增大，荧光波长随着而长移，荧光强度增强。这是因为在极性溶剂中，π?π*跃迁所需的能量差△E小，而且跃迁几率增加，从而使紫外吸收波长和荧光波长均长移，强度也增强。 ② 溶剂 1.基本原理 溶剂粘度减小，荧光强度减弱。溶剂粘度减小时，可以增加分子间碰撞机会，使无辐射跃迁增加而荧光减弱。故荧光强度随溶剂粘度的减小而减弱。由于温度对溶剂的粘度有影响，一般是温度上升，溶剂粘度变小，因此温度上升，荧光强度下降。 ② 溶剂 1.基本原理 ③ pH值的影响 带有酸性或碱性官能团的大多数芳香族化合物的荧光与溶液的pH有关。 具有酸性或碱性基团的有机物质，在不同pH值时，其结构可能发生变化，因而荧光强度将发生改变；对无机荧光物质，因pH值会影响其稳定性，因而也可使其荧光强度发生改变。 对于金属离子与有机试剂形成的发光鏊合物，一方面pH会影响鏊合物的形成，另一方面还会影响鏊合物的组成，因而影响它们的荧光性质。 1.基本原理 ④ 荧光熄灭剂的影响 荧光熄灭是指荧光物质分子与溶剂分子或溶质分子相互作用引起荧光强度降低的现象。 引起荧光熄灭的物质称为荧光熄灭剂。 常见的荧光熄灭剂有卤素离子、重金属离子、氧分子、硝基化合物、重氮化合物、羰基化合物、羧基化合物。 1.基本原理 在浓度较高的荧光物质溶液中，单重激发态的分子在发生荧光之前和未激发的荧光物质分子碰撞而引起的自熄灭现象。 i.碰撞猝灭 有些荧光物质分子在溶液浓度较高时会形成二聚体或多聚体，使它们的吸收光谱发生变化，也引起溶液荧光强度的降低或消失。 ii.静态息灭 1.基本原理 小部分光子和物质分子相碰撞，使光子的运动方向发生改变而向不同角度散射。 ⑤ 散射光的干扰 瑞利光：光子和物质发生弹性碰撞，不发生能量交换，只是光子运动方向发生改变。其波长与入射光波长相同。 拉曼光：光子和物质发生非弹性碰撞，发生能量交换，光子把部分能量转移给物质分子或从物质分子获得部分能量。从而发射出比入射光稍长或稍短的光。 1.基本原理 散射光对荧光测定有干扰，尤其是波长比入射光波长更长的拉曼光，与荧光波长接近，对测定的干扰大，必须采取措施消除。拉曼光的干扰主要来自溶剂，当溶剂的拉曼光与被测物质的荧光光谱相重叠时，应更换溶剂或改变激发光波长。 1.基本原理 2.1 荧光分光光度计 由光源、单色器、液槽、检测器和信号显示记录器五部分组成。 （1）激发光源 氙灯光源：波长范围250~800nm连续光谱。是应