浙江大学生物化学实验甲维生素C的定量测定(26-二氯酚靛酚滴定法).pptVIP

维生素C的定量测定 （2，6-二氯酚靛酚滴定法） 1、维生素C简介 维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，食物中如缺乏，将会导致坏血病，因此又称为抗坏血酸。 植物的绿色部分及许多水果（如橙子、橘子、苹果、草莓、山楂、鲜枣、猕猴桃等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿、豆芽菜、辣椒等）中维生素C的含量尤为丰富。 维生素C为一种稍有酸味的糖类白色晶体，易溶于水，不溶于有机溶剂。在酸性溶液中比在中性及碱性溶液中稳定，易被热、光及某些金属离子（Cu2+ 、Fe2+等破坏。 维生素C的定量测定 （2，6-二氯酚靛酚滴定法） 维生素C具有很强的还原性，参与体内多种氧化还原反应，是一些氧化还原酶的辅酶。金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可催化维生素C氧化为脱氢型（氧化型）。还原型和氧化型都具有活力。 2、维生素C的测定原理 根据维生素C的还原性可测定其含量，常用2，6-二氯酚靛酚测定法。还原性抗坏血酸能还原染料2，6二氯酚靛酚，本身则氧化为脱氢型。在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色。 维生素C的定量测定 （2，6-二氯酚靛酚滴定法） 因此，当用此染料滴定含有维生素C的酸性溶液时，维生素C尚未全部被氧化前，则滴下的染料立即被还原成无色。一旦溶液中的维生素C已全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。 所以，当溶液从无色转变成微红色时即表示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化，此时即为滴定终点。如无其它杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原性抗血酸量成正比。 0 0 维生素C的定量测定 （2，6-二氯酚靛酚滴定法） 滴定终点：当溶液从无色转变成微红色（15s内不消退）时即表示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化，此时即为滴定终点。 2，6-二氯酚靛酚滴定法的特点：简便，快速，比较准确，适用于许多不同类型样品的分析。缺点是不能直接测定样品中的氧化型抗坏血酸，并且，易受其它还原物质的干扰，如果样品中含有色素类物质，还会给滴定终点的观察造成困难。 3、材料与试剂 ⑴、实验材料 维生素C的定量测定 （2，6-二氯酚靛酚滴定法） 橘子、青椒等。 ⑵、试验试剂 标准抗坏血酸溶液和2，6-二氯酚靛酚溶液配制时的注意事项参P162。 4、操作方法 操作步骤及注意事项参P162-P163。 5、实验结果及处理 准确纪录所称青椒的克数； 仔细观察滴定终点，准确记录滴定所用 2，6-二氯酚靛酚的毫升数，代入下列公式计算维生素C的含量： 维生素C的定量测定 （2，6-二氯酚靛酚滴定法） VA：滴定样品所耗用的染料的平均体积（ml） VＢ：滴定空白对照所耗用的染料的平均体积（ml） C：样品提取液的总体积（ml） D：滴定时所取的样品提取液体积（ml） T：１ml染料能氧化抗坏血酸的质量（mg）（由操 作二计算出） W：待测样品的质量（g） * O C HO C HO C H C HO CH CH2OH O 还原型抗坏血酸 O C O C O C H C HO CH CH2OH O 氧化型抗坏血酸 Cl N Cl O OH Cl N Cl O O- Cl N Cl HO OH H 还原型2，6-二氯酚靛酚（无色） 氧化型2，6-二氯酚靛酚（粉红色） （蓝色） H+ OH- + + （被还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量成正比） 维生素C含量（mg/100g样品）= （VA-VB）×C×T D×W × 100 *