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重组新生血管生成抑制因子rh．K4K5的功能及表达条件优化
本课题用毕赤酵母GSll5表达人纤溶酶原的K4．5区重组蛋白，为
了提高重组蛋白K4-5的产量，我们分析了温度、接种密度、培养基组
成、PH值及渗透压等参数对K4．5表达量的影响。在培养基中添加精
氨酸、酪蛋白水解物或EDTA能提高K4—5的产量。接种密度提高也能
促进K4—5的表达。其最适表达PH值为6．0，最适表达温度为30℃。
在此基础上，我们初步建立了rh．K4K5工程菌的高密度中试发酵和纯
化路线。使用30L发酵罐，工程菌在对数生长期生长24小时左右，菌
液密度OD600达到150左右后，诱导表达36小时，表达产物超过
700mg／L。发酵上清经超滤浓缩、凝胶过滤、离子交换后，得到的
(HUVEC)的增殖，其半效抑制浓度约为70nmol／L。
关键词：毕赤酵母 K4．5 HUVEC诱导表达
Functionand conditionsforthe ofrecombinant
optimal expression
4-5of inPichia
kringleplasmiuogcn
pastoris
Pichia GS115 wasusedto
pastoris 4-5of
expresskringle
K4—5wasabletoinhibitthe of
plasminogen．Recombinant human
growth
umbilicalvein
endothelial order
to rK4．5
cells(HUVEC)．Inimprove
weexamined suchas
production parameterstemperature，celldensity，
medium andosmotic ofthe
composition，pH stress．Supplementation
inductionmediumwith acidsorEDTA
arganine，casmino riseto
gave
levelsofK4—5 inoculum
higher production．Increasingalso
density
increasedtheK4-5 medium
valueat6．0and
production．InductionpH
incubationat30℃weremostconducive
toK4．5
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