5。动物细胞制药.pptxVIP

第五章 动物细胞工程制药; 细胞是生物体的基本结构单位和功能单位，单细胞生物，一个细胞就是一个个体，而多细胞生物则由许多细胞组成一个个体。我们所看到的生物体都是由多细胞所组成。在多细胞生物体中，由形态结构相似的细胞再组成组织，执行着生物体中的部分功能。 ;细胞工程（cell engineering） 应用细胞生物学和分子生物学方法，借助工程学的试验方法或技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性和生物学特性，以获得特定的细胞、细胞产品或新生物体的有关理论和技术方法的学科。 广义的细胞工程包括所有的生物组织、器官及细胞离体操作和培养技术，狭义的细胞工 程则是指细胞融合和细胞培养技术。 根据研究对象不同，细胞工程可分为动物细胞工程和植物细胞工程。 ;; 动 物 细 胞 培 养 胚胎或幼龄动物的组织器官（细胞来源） ;应用;细胞分化 多细胞生物体是由各种各样形态和功能都不同的细胞群所组成。高等动、植物由受精卵细胞开始的胚胎发生过程随着细胞分裂次数的增加而使得早期胚胎的细胞数量也增加许多。其中有些细胞在形态、结构和功能上逐渐发生了差异，这种细胞之间差异的发生过程就是细胞分化。个体发育的过程就是细胞分化的过程，个体的各种器官和组织都是通过细胞分化形成的。 ;离体细胞的形态 贴壁细胞：来自动物实体组织的大多数细胞需要贴壁单层生长。一般成纤维样或上皮样细胞型。 悬浮细胞：细胞无需贴附到固体介质上就能生存和生长的细胞。来自血液、淋巴系统的细胞和大多数肿瘤细胞常为非贴壁依赖性的，它们形态呈圆形。 兼性贴壁细胞：不严格依赖支持物。; 动物细胞的化学组成 水分85%，无机盐1-1. 5%，蛋白质7-10%，脂质1-2%，其他有机物1.5%。 动物细胞的代谢 糖、脂肪、蛋白质的降解代谢分三阶段：第一阶段是大分子降解为小分子；第二阶段是小分子代谢产生乙酰辅酶A、α-酮戊二酸和草酰乙酸；第三阶段是三羧酸循环。 动物细胞体外培养的主要能源来自葡萄糖和谷氨酰胺，如何提高DO2？ 在高密度培养时加部分果糖。;动物细胞的生理特点 1、动物细胞的分裂周期长(12-48hr) ;2、细胞生长需贴附于基质，并有接触抑制现象 3、正常二倍体细胞的寿命有限 4、动物细胞对周围环境敏感 5、动物细胞对培养基要求高 6、动物细胞蛋白质的合成途径和修饰功能和细菌不同;动物细胞和微生物细胞的总体差异;动物细胞培养的特性 动物细胞培养是指在合适的培养条件下，动物细胞离体生长和增殖，并保持其特性和功能的技术，这些细胞不再形成组织。 ;细胞生长缓慢，易污染，培养需用抗生素 细胞大，无细胞壁，机械强度低，环境适应性差 需氧少，不耐受强力通风和搅拌 群体生长效应，贴壁生长（锚地依赖性） 培养过程产品分布细胞内外，成本高 原代培养细胞一般繁殖50代即退化死亡 ; 细胞生长的类型 贴壁依赖性 来自动物实体组织的大多数细胞需要贴壁单层生长。只要它们没有转化为非贴壁依赖性的必须贴伏在合适的固体介质上并铺展，才能生长。 非贴壁依赖性 细胞无需贴附到固体介质上就能生存和生长的细胞。来自血液、淋巴系统的细胞和大多数肿瘤细胞常为非贴壁依赖性的，它们形态呈圆形。;生长特性 贴壁依赖型细胞在培养时要贴附于培养（瓶）器皿壁上，细胞一经贴壁就迅速铺展，然后开始有丝分裂，并很快进入对数生长期。一般数天后就铺满培养表面，并形成致密的细胞单层。 ; 贴壁培养的优点●容易更换培养液；细胞紧密黏附于固相表面，可直接倾去旧培养液，清洗后直接加入新培养液。●容易采用灌注培养，从而达到提高细胞密度的目的；因细胞固定表面，不需过滤系统。●当细胞贴壁于生长基质时，很多细胞将更有效的表达一种产品。●同一设备可采用不同的培养液/细胞的比例。●适用于所有类型细胞。 ; 贴壁培养的缺点 和悬浮培养法相比●扩大培养比较困难，投资大； ●占地面积大； ●不能有效监测细胞的生长。 ; 细胞培养物的获得 原代培养物 在无菌条件下，用镊子和剪刀将切下的组织剪碎成小块，再用胰蛋白酶等蛋白水解酶处理，使组织解离成单个细胞，放入培养容器中无菌培养。这种原代培养物中含有各种不同分化的细胞类型，它们的生长速率不同，成纤维细胞最易生长，常会在此后的传代培养中占据优势。仔细控制培养基的成分，可以选择性地支持某些细胞类型的