玉米纹枯病菌细胞核纯化与原生质体转化的探讨-中国农业大学.PDF

植物病理学报 ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ　 ４４(３):２６５￣２７５(２０１４) 玉米纹枯病菌细胞核纯化与原生质体转化的探讨 １ꎬ２ꎬ３ １ꎬ２ ３ １ꎬ２∗ ３∗ 张 眉 ꎬ周善跃 ꎬ陈旭君 ꎬ李宝笃 ꎬ郭泽建 １ ２ ( 青岛农业大学农学与植物保护学院ꎬ青岛２６６１０９ꎻ 山东省植物病虫害综合防控重点实验室ꎬ青岛２６６１０９ꎻ ３ 中国农业大学农学与生物技术学院ꎬ北京１００１９３) 摘要:引起玉米纹枯病的立枯丝核菌(Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ Ｋüｈｎ)多为多核杂核真菌ꎬ也难以通过有性态使其细胞核进行单一 化ꎮ 利用原生质体再生的方法对单核玉米纹枯病菌ＪＮ 的细胞核进行同核纯化ꎬ比较从单个原生质体再生菌获得的ｒＤＮＡ￣ ＩＴＳ序列ꎬ发现序列间存在差异ꎬ说明其细胞核没有达到预期纯化的效果ꎮ 继而扩增了双核和多核玉米纹枯病菌的ｒＤＮＡ￣ ＩＴＳ序列ꎬ发现它们自身的ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ序列也存在差异ꎬ因此认为立枯丝核菌的这种ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ序列的差异可能是长期未经 过有性阶段的结果且与其细胞核数目无关ꎮ 使用转化丝状真菌的载体转化纹枯菌未获得稳定的转化子ꎬ进而对载体进行 了改造ꎬ用纹枯菌(ＡＧ￣３)ａｃｔｉｎ基因的启动子和终止子控制潮霉素基因构建了载体ｐＲｓＡꎮ 利用ＰＥＧ介导的原生质体转化 方法ꎬ实现了对单核纹枯菌的转化ꎬＰＣＲ验证得到３个转化子ꎮ 但在ＰＤＡ培养基连续继代５代后ꎬ转化子的潮霉素抗性消 失ꎮ 结果对改进纹枯菌的转化方法有借鉴意义ꎮ 关键词:玉米纹枯病菌ꎻ原生质体ꎻＰＥＧ介导的转化 Ａ ｇｌｉｍｐｓｅ ｏｆ ｐｒｅｐａｒｉｎｇ ｈｏｍｏｋａｒｙｏｔｉｃ ａｎｄ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉｔｈｒｏｕｇｈ ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓ １ꎬ２ꎬ３ １ꎬ２ ３ １ꎬ２ ３ 　 ＺＨＡＮＧ Ｍｅｉ ꎬＺＨＯＵ Ｓｈａｎ￣ｙｕｅ ꎬＣＨＥＮ Ｘｕ￣ｊｕｎ ꎬＬＩ Ｂａｏ￣ｄｕ ꎬＧＵＯ Ｚｅ￣ｊｉａｎ １ ２ ( Ａｇｒｏｎｏｍｙ ａｎｄ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ＣｏｌｌｅｇｅꎬＱｉｎｇｄａｏ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＱｉｎｇｄａｏ ２６６１０９ꎬＣｈｉｎａꎻ Ｋｅｙ Ｌａｂ ｏｆ Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ３ Ｃｒｏｐ ＰｅｓｔｓＭａｎａｇｅｍｅｎｔｏｆＳｈａｎｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅꎬＱｉｎｇｄａｏ２６６１０９ꎬＣｈｉｎａꎻ ＡｇｒｏｎｏｍｙａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏｌｌｅｇｅꎬＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌ￣ ｔｕｒａｌ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＢｅｉｊｉｎｇ １００１９３ꎬＣｈｉｎａ) Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ Ｋüｈｎꎬｔｈｅ ｃａｕｓａｌ ａｇｅｎｔ ｏｆ ｃｏｒｎ ｓｈｅａｔｈ ｂｌｉｇｈｔꎬａｒｅ ｍｏｓｔｌｙ ｍｕｌｔｉｎｕｃｌｅａｒ ａｎｄ ｈｅ￣ ｔｅｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｆｕｎｇｉꎬａｎｄｉｔｉｓｄｉｆｆｉｃｕｌｔｔｏｏｂｔａｉｎｔｈｅ ｓｉｍｐｌｉｆｙｉｎｇｎｕｃｌｅｕｓｄｕｒｉｎｇｔｈｅｐｅｒｆｅｃｔ ｓｔａｇｅ.Ｉｎｔｈｅ ｓｔｕｄｙꎬｔｈｅ ｎｕｃｌｅｕｓ ｏｆ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ Ｒ. ｓｏｌａｎｉ ｓｔｒａｉｎ ＪＮ ｗａｓｐｕｒｉｆｉｅｄ ｂｙ ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｕｌｔｕｒｅｓｔｈａｔ ｅａｃｈ ｗａｓｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｓｉｎｇｌｅｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ ｗａｓｃｏｍｐａｒｅｄ. Ｓｉｎｃｅ ｔｈｅｒＤＮＡ￣