高效液相色谱串联API四 极杆质谱仪.pptVIP

标准曲线的绘制 配置储备液 用储备液配置标准物质绘制峰面积和质量浓度的标准曲线（可是由于实验仪器出现故障实验告一段落，并未开始做） 后续工作 因为实验仪器问题和仪器问题我们的实验告一段落，后续工作如回收率，定量限，加标回收相对标准偏差，回收率只能让秦博士独自来完成，希望老师能够一切顺利。 高效液相色谱串联API四 极杆质谱仪 高效液相色谱法 是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析 。 特点 四高：高压、高速、高效、 高灵敏度 一广：应用范围广。 与气相色谱法相比：高效液相色谱法不受试样的挥发性和热稳定性限制，应用范围广 质谱法(MS) 质谱法(MS)：即用电场和磁场将运动的离子按它们的质荷比分离后进行检测的方法。 质谱技术 质谱分析过程：样品通过进样系统进入离子源，由于结构性质不同而电离为各种不同质荷比（m/z） 的分子离子和碎片离子，而后，带有样品信息的离 子碎片被加速进入质量分析器，不同的离子在质量 分析器中被分离并按质荷比大小依次抵达检测器， 经记录即得到按不同质荷比排列的离子质量谱，也 就是质谱 (mass spectrum)。 质谱的优点 质谱法的优点： 1、应用范围广 2、分析速度快 3、灵敏度高，耗样量少 它们的优点，你记住了吗？ 高效液相色谱——质谱联用技术 HPLC—MS联用了两者的优点，包括HPLC的高压、高速、高效、高灵敏度和MS的分析速度快的优点。可以应用该技术测定复杂生物样本中的微量药物，同时也是进行药物及有关物质定性分析的常用方法。 样品 高效液相色谱仪 接口 质量分析器 数据处理 真空系统 HPLC-MS仪器组成框架图 接口和离子化的方式 接口的作用 将流动相及其样品气化 分离出去大量的流动相分子 完成样品分子的电离 接口和离子化方式 接口的类型 传送带接口（MB） 粒子束接口（PB） 连续流动快原子轰击（CFFAB） 直接导入接口（DLI） 热喷雾接口（TSP） 大气压离子化接口（API） 大气压离子化接口（API） （1）电喷雾电离（ESI） （2）大气压化学离子化（APCI) （1）电喷雾电离（EPI） 流出液在高电场下形成带电喷雾，在电场力作用下穿过气帘； 气帘的作用：雾化；蒸发溶剂；阻止中性溶剂分子 电喷雾电离（ ESI）的特点 通常小分子得到[M+H]+ 、[M+Na]+ 或[M-H]-单电荷离子； 最软的电离技术，通常只产生分子离子峰，因此可直接测定混合物； 生物大分子产生多电荷离子，其易形成多电荷离子的特性可分析蛋白质和DNA等生物大分子； 通过调节离子源电压控制离子的碎裂（源内CID）测定化合物结构。 大气压化学离子化（APCI） 样品液从由具有雾化气套管的毛细管端流出，经氮气流雾化，通过加热管被气化，后经电晕尖端放电，溶剂分子被电离形成溶剂离子，然后雾化气和这些溶剂分子与气态样品分子反应，得到样品分子的准分子离子 双聚焦扇形磁场-电场串联仪器(sector). 四极质谱仪(Q). 离子阱质谱仪（TRAP） 飞行时间质谱仪(TOF). 傅里叶变换-离子回旋共振质谱仪(FT-ICRMS). ┏四极+TOF（Q-TOF） 串列式多级质谱仪┫三重四极（QqQ） (MS/MS) ┗TOF+TOF 质量分析器 三重四级杆的概念 四极杆是质量分析器的一种三重四极杆也就是一般的LC/MS/MS,一个MS就是一个四极杆，但是第二个四极杆一般作碰撞室，所以只有两个MS做质量分析器，即只有MS/MS,但是一般都叫三重四极杆。当然碰撞室也不一定是四极杆，也有六极杆的碰撞室的，但是大家都叫习惯了 案例（目前还在探索过程中） 液相色谱——串联质谱法（HPLC-MS/MS) 同时测定地表水中的2,4-二氯酚，2,4,6- 三氯酚，五氯酚，苦味酸。 实验所需要的最佳条件 从以下几个方面来综合考虑 （1）缓冲溶液的选择 （2）缓冲溶液的PH （3）缓冲溶液和流动相甲醇比例的选择 （4）缓冲溶液的浓度 得出最佳的条件 经过不断的实验，和在电脑上观察苦味酸，2,4-二氯酚，2,4,6-三氯酚，五氯酚以及苦味酸的峰型并用积分工具得出峰高峰宽和峰面积，最后发现采用80%的甲醇与20%缓冲溶液（2mM乙酸铵PH=4.00） 改善样品分离和缩短