乙型肝炎病毒YMDD.pptVIP

乙肝病毒YMDD变异的检测 乙型肝炎病毒 (hepatitis B virus, HBV) HBV属于嗜肝DNA病毒科。其基因组大小 仅约3200 bp，是已知真核细胞病毒中最小的DNA 病毒。 乙型肝炎流行病学 何为YMDD变异 HBV P区编码的DNA聚合酶基因在739或741位点发生突变，其编码的HBV逆转录酶活性部位——“酪氨酸（Y）－蛋氨酸（M）－天门冬氨酸（D）－天门冬氨酸（D）”(YMDD主型区)，变为“酪氨酸（Y）－缬氨酸（V）－天门冬氨酸（D）－天门冬氨酸（D）”（YVDD）或“酪氨酸（Y）－异亮氨酸（I）－天门冬氨酸（D）－天门冬氨酸（D）”（YVDD）导致逆转录酶亚结构发生改变，妨碍了与拉米夫定的结合，从而造成HBV对拉米夫定敏感性下降。 YMDD突变 Met-----ATG YMDD Val------GTG YVDD Ile-------ATT ATC YIDD ATA YMDD变异的发生 病 毒 拉米夫定治疗HBV感染治疗过程与YMDD变异关系 对拉米夫定耐药株的防治 针对病毒 阿地福韦 拉米夫定+阿地福韦 拉米夫定+干扰素? (或IFN?续贯治疗) Lamifudine抗HBV治疗过程中需注意的病毒变异问题 Lamifudine对HBV YMDD野生型的抗病毒作用优于Adefovir，而且对机体潜在副作用也小于Adefovir，所以针对携带HBV YMDD野生型患者，首选择Lamifudine。 在Lamifudine治疗过程中动态监测YMDD变异情况，一旦出现YMDD变异，改用Adefovir，这样可以持续抑制病毒变异株，第一时间就使病毒变异株就处在抑制状态。 在使用Adefovir药物治疗过程，也动态检测YMDD变异情况，防止YMDD野生株回复成优势株，一旦出现YMDD野生株成为优势株，改用Lamifudine或者联合Lamifudine和Adefovir抗HBV治疗是可取的。通过对YMDD变异的动态监测，有助于合理选择药物，长期使HBV处于低水平复制状态，甚至耗竭HBV cccDNA库，达到彻底消除HBV的目的。 病毒耐药性的诊断 表型耐药－在治疗期间血清病毒DNA水平上升 基因型耐药－病毒多聚酶基因出现突变 基因测序法 这是一种比较经典的方法，突变检测的准确性为100％，但测序周期较长，仪器昂贵，不适于临床大面积推广 ELISA法和PCR-RFLP法 操作繁琐，费时，不适合当天出检测报告 在进行PCR扩增后进行开放性实验，容易造成标本的交叉污染，影响实验室的质量控制 生物芯片 需要配置芯片仪，一次性投入资金较大， 且芯片成本较高，不适于在临床大面积推广 需要开放式杂交，会造成一定的交叉污染，影响结果 Taqman荧光定量PCR原理 特异性荧光双标记探针 Taq酶 5’→3’外切酶活性 试剂原理 野生型 变异型 * * P区最长，约占基因组75%以上，编码病毒体DNA多聚酶。 HBV DNA负链有四个开放区，分别称为S、C、P及X HBsAg Epidemicity 8% and above = High 2% - 8% = Intermediate Below 2% = Low Lamivudine and wild-type HBV HBV polymerase Nucleotides (wild-type) high affinity Lamivudine inhibition ss (-) DNA Y M D D Lamivudine and YMDD variant HBV Nucleotides ss (-) DNA HBV polymerase (variant) Y V/I D D reduced affinity Lamivudine weak inhibition 病毒多聚酶 缺乏矫正功能 Lamifudin 作为选择因素 对耐药突变株的选择 病毒高复制 高变异率 Lamifudine停药后 YMDD野生株恢复 8（66.7%） 4（33.3%） 12 24个月 9（56.3%） 7（43.7%） 16 18个月 12（32.4%） 25（67.5%） 37 12个月 4（11%） 33（89%） 37 9个月 33（24%） 106（76%） 139 治疗前 变异 无变异 （YMDD） 研究例数（例） 治疗过程 引自J Virol. Metods 1999；83：181-187 针对宿主 细胞因子 HBV DNA疫苗 诱导持续病毒抑制 恢复特异性抗H