2017高考生物考前冲刺复习-第1部分-专题突破方略-专题十六-基因工程和细胞工程讲义.docVIP

专题十六 基因工程和细胞工程 　1.基因工程的诞生(Ⅰ)　2.基因工程的原理及技术(含PCR)(Ⅱ)　3.基因工程的应用(Ⅱ)　4.蛋白质工程(Ⅰ)　植物的组织培养(Ⅱ)　6.动物的细胞培养与体细胞克隆(Ⅱ)　7.细胞融合与单克隆抗体(Ⅱ) 1．关于基因工程的3个误区(1)误认为只能用同一种限制酶切割质粒和含有目的基因的片段。其实可以用不同限制酶切割只要二者切割后产生相同黏性末端即可。(2)误将目的基因导入受体细胞当作基因工程成功的标志。基因工程是否成功表现在目的基因是否成功表达。(3)误认为启动子就是起始密码子终止子就是终止密码子。启动子和终止子位于DNA分子上其作用和转录有关起始密码子和终止密码子位于RNA上其作用与翻译有关。关于细胞工程的2个误区(1)误认为原生质体的制备是原生质体融合。原生质体的制备是用纤维素酶和果胶酶处理植物细胞使植物细胞壁去掉而获得原生质体；而原生质体融合是指去壁的植物细胞融合。(2)不能正确区分杂种细胞、重组细胞和原生质体融合融合的原生质体形成细胞壁之后形成的细胞叫杂种细胞。重组细胞：体细胞的细胞核移植到去核卵母细胞之后形成的细胞叫重组细胞。杂交细胞：动物细胞融合形成的细胞常称为杂交细胞。考点一　基因工程 　(2016·高考全国卷乙)某一质粒载体如图所示外源DNA插入到或中会导致相应的基因失活(表示氨苄青霉素抗性基因表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用酶切后与用酶切获得的目的基因混合加入DNA连 (1)质粒载体作为基因工程的工具应具备的基本条件有____________________________(答出两点即可)而作为基因表达载体除满足上述基本条件外还需具有启动子和终止子。(2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选在上述四种大肠杆菌__________________________________________________；并且____________和______________的细胞也是不能区分的其原因是______________________________________________。在上述筛选的基础上若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌单菌落还需使用含有________的固体培养基。(3)基因工程中某些噬菌体经过改造后可以作DNA复制所需的原料来自________。【解析】　(1)作为运载体的质粒上应有一个至多个限制酶切割位点在细胞中能够自我复制且含有特殊的标记基因。(2)未被转化的大肠杆菌和仅含环状目的基因的大肠杆菌中均未导入质粒载体而质粒上含有氨苄青霉素抗性基因因此这样的大肠杆菌在含有氨苄青霉素的培养基中不能生长。含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌中都含有氨苄青霉素抗性基因BamH Ⅰ切割质粒后将四环素抗性基因破坏因此可将经氨苄青霉素培养基筛选出的菌落置于含有四环素的培养基上再次筛选能在含四环素培养基上生存的是含有质粒载体的大肠杆菌不能生存的是含有插入目的基因的重组质粒的大肠杆菌。(3)噬菌体为病毒经改造后作为载体时其DNA复制所需原料来自受体细胞。【答案】　(1)能自我复制、具有标记基因　(2)二者均不含有质粒载体　含有插入了目的基因的重组质粒(或答含有重组质粒)　二者均含有氨苄青霉素抗性基因在该培养基上均能生长　四环素　(3)受体细胞 1．获取目的基因的3种途径(1)从基因文库中获2)PCR技术扩增原理：DNA复制原理。需要条件：模板DNA、引物、四种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶(酶)。过程：DNA受热变性解旋为单链、冷却后RNA引物与单链相应互补序列结合然后在DNA聚合酶作用下延伸合成互补链。(3)化学方法人工合成。基因表达载体的组成目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因＋复制原点。使用限制酶的注意点1)一般用同一种限制酶切割载体和获取目的基因。(2)不同的限制酶也能切割出相同的黏性末端。目的基因导入受体细胞的方法(1)导入植物细胞农杆菌转化法；②基因枪法；③花粉管通道法。(2)导入动物细胞：显微注射法。(3)导入微生物细胞：Ca＋处理法(感受态细胞法)。目的基因的检测与鉴定的方法(1)检测目的基因是否导入受体细胞：DNA分子杂交法。(2)检测目的基因是否转录出mRNA：分子杂交技术。(3)检测目的基因是否翻译出蛋白质：抗原—抗体杂交技术。(4)个体生物学水平鉴定：根据表达性状判断。基因工程的常考点(1)目的基因插入位置：启动子与终止子之间。(2)将目的基因导入受体(3)常用的受体细胞①植物：受精卵、体细胞。动物：受精卵。微生物：大肠杆菌、酵母菌等。(4)原核生物作为受体细胞的优点：多为单细胞、繁殖快、遗传物质相对较少。　考查基因工程操作的基本工具和流程(2016·高考全国卷丙改编)a)中的三个DNA片段上依次表示出了、Ⅰ和三种