鬼臼毒素衍生物CIP-36抗肿瘤多药耐药作用机制的研究.pdf

中文摘要 鬼臼毒素衍生物CIP．36抗肿瘤多药耐药作用机制研究 摘 要 目的：本文研究新鬼臼毒素衍生物CIP一36对多种多药耐药肿瘤细胞 株和动物移植性肿瘤的抑制作用，并初步探讨其作用机制。 方法： 1 MTT法和SRB法检测CIP．36的体外抗肿瘤活性。 2光学和荧光显微镜观察CIP．36作用后肿瘤细胞形态结构的变化。 4流式细胞术分析CIP．36对K562／A02细胞周期及凋亡率的影响。 5 K562和f或)K562／A02细胞mdr-1、p53、p2 II mRNA表达的影响。 cyclinA、cyclinBl、topoII伐、topo13 DNA断裂法检测CIP．36对拓扑异构酶II伐活性的影响 7超螺旋pBR322 8利用动物移植肿瘤模型研究CIP一36体内抗肿瘤作用。 结果： ． 1CIP．36的体外抗肿瘤活性 示了更强的抗肿瘤活性，且无耐药性出现。同时对人的正常血管内皮细胞 (VEC)、成纤维细胞(FB)具有低毒性，，对肿瘤细胞有较好选择性。 肿瘤细胞及其亲本株都具有生长抑制作用，并呈剂量依赖性，同等浓度的 ，。 ； ●’； ～ 中文摘要 CIP一36抑制肿瘤细胞生长活性高于阳性对照依托泊苷(VP．16)。 2CIP．36的体内抗肿瘤作用 鼠实体型肉瘤$180的生长抑制率分别为55．1 1％和62．72％，高低剂量组与 对照组相比均具有显著性差异(PO．01)，并有一定剂量依赖性。且在小 鼠体重降低方面各治疗剂量组(P0．05)与阳性对照组(依托泊苷) 良好的肿瘤抑制作用，且无明显毒副作用。 3CIP．36诱导多药耐药肿瘤细胞凋亡 料Hoechst 33342对细胞进行染色，并利用光学和荧光显微镜观察。光学显 微镜下观察发现CIP．36可使细胞核染色质发生聚集、碎裂；荧光显微镜下 观察发现低浓度CIP．36可使细胞核膜皱缩，染色质凝集，深染，中高浓度 组多数细胞形成众多大小不等的凋亡小体，具有一定的量效关系。不同浓 ladder)。 提取总聊妊进行琼脂糖凝胶电泳，呈现显著“DNA梯子”(DNA 胞的比例随着CIP．36浓度的升高和作用时间的延长而增加。以上结果从形 态学、生化学、流式细胞仪三个角度均显示了CIP．36能够诱导多药耐药肿 瘤细胞凋亡。 4CIP．36对多药耐药肿瘤细胞(K562／A02)周期的影响 后，发现其中6h、12h细胞周期被阻断在S期，而24h细胞周期被阻断在 S／G2+M期。 5 110【、 topoII mRNA表达及mdr-1编码的 因PCNA，细胞周期相关基因cyclinA、cyclinBl 蛋白P．gp表达的影响。 中文摘要 0L 11 mRNA的表达，下调bcl．2、PCNAmRNA p21、bax、caspase．3、topo II伐 及cyclinA mRNA IIB的mRNA表达