生物奥赛之生物化学重点串讲核酸.ppt

重点内容 核酸的功能 （一）DNA是主要的遗传物质（携带与传递遗传信息） （二）RNA功能的多样性（参与遗传信息的表达、调节遗传信息的表达、催化功能。。。。。。。） tRNA rRNA mRNA 其他的RNA 两类核苷酸的基本化学组成 构成DNA的核苷酸：5’－脱氧核苷酸 构成RNA的核苷酸：5’－核苷酸 二、核酸的共价结构 核酸（DNA与RNA）是核苷酸聚合成的生物大分子，无分支结构。 核酸的共价结构就是核酸的一级结构，通常指核酸的核苷酸序列。 DNA与RNA均以3,5-磷酸二酯键连接核苷酸。 DNA一级结构的特点 无分支的线形或环形链； DNA链很长，分子量很大，编码巨大的信息量； 真核生物与原核生物具有不同的特性 RNA一级结构的特点 无分支的线形链； 不同种类具有不同结构： 三、DNA的三维空间结构 二级结构：DNA的两条多聚核苷酸链间通过氢键形成的双螺旋（double helix）结构。 三级结构：DNA双链进一步折叠卷曲形成的构象。 四级结构：DNA与蛋白质的复合体结构 （一）DNA的二级结构 Watson-Crick双螺旋结构模型 碱基位于双螺旋的内侧，磷酸与脱氧核糖在双螺旋外侧，构成DNA分子的骨架；外部亲水，内部疏水。 碱基平面接近与纵轴垂直，糖环的平面接近与纵轴平行。 (二）DNA的三级结构 DNA在双螺旋的基础上通过扭曲和折叠形成的构象 包括不同二级结构单元间的相互作用、单链与二级结构单元间的相互作用以及DNA的拓扑特征 超螺旋（supercoil）是DNA三级结构的主要形式 （三）DNA与蛋白质复合物的结构（四级结构） tRNA的高级结构 三叶草形二级结构：茎＋环 倒L形三级结构 核酸的水解 核酸的酸碱性质 核酸的紫外吸收 核酸的变性和复性 一、核酸的水解 对酸的敏感性：糖苷键＞磷酸酯键，脱氧核糖＞核糖 RNA的磷酸酯键对碱敏感，DNA抗碱水解（生理意义） 酶水解：酶的专一性；限制性内切酶（特点、应用） 二、核酸的酸碱性质 碱基、核苷与核苷酸均能发生解离 核苷酸与核酸的磷酸基具有酸性，碱基具有碱性，因此核苷酸与核酸具有两性解离的性质。 核苷酸与核酸中磷酸基的酸性大于碱基的碱性，其等电点偏低（等电点的应用） 三、核酸的紫外吸收 紫外吸收光谱的应用 鉴定纯度 核苷酸与核酸含量计算 判断变性（增色效应、减色效应） 四、核酸的变性、复性及杂交 熔解温度（Tm）： 加热变性使DNA的双螺旋结构失去一半时的温度。 (二)复性 (三) 分子杂交（hybridization） 分子杂交的种类 Southern Blotting：检测DNA Northern Blotting：检测RNA 核酸含量的测定 紫外分光光度法 核酸的凝胶电泳 核酸测序 DNA聚合酶链反应（PCR） PCR：体外扩增DNA的技术 核酸的结构 四、RNA的结构 RNA通常是单链线型分子 RNA可自身回折形成局部双螺旋（二级结构），并进一步折叠形成三级结构 RNA可与蛋白质形成核蛋白复合体（四级结构，例如核糖体） 核酸的结构 核酸的结构 维系tRNA三级结构的因素：氢键、碱基堆积力 tRNA分子功能：转运氨基酸 tRNA分子具有与其功能相适应的柔韧性。 核酸的理化性质 核酸的理化性质 核酸的理化性质 核酸的理化性质 嘌呤碱与嘧啶碱具有共轭双键，使碱基、核苷、核苷酸和核酸在240－290nm的紫外波段有强烈的光吸收 λmax≈260nm 核酸的理化性质 在DNA的变性过程中，? (P)值增大（增色效应，hyperchromic effect） 在DNA的复性过程中，? (P)值减小（减色效应，hypochromic effect） 核酸的理化性质 (一)变性（denaturation） 核酸双螺旋区的氢键断裂，变成单链，不涉及共价键断裂。 核酸的理化性质 melting temperature 影响DNA的Tm值的因素 核酸的理化性质 变性DNA在适当的条件下，两条彼此分开的单链可以重新缔合成为双螺旋结构，这一过程称为复性。 影响DNA复性的因素 降温速率，负效应（热变性的DNA在缓慢冷却的条件下可以复性，称为退火－annealing） 核酸的理化性质 在变性的DNA溶液中加入外源DNA单链分子或RNA单链分子（与原DNA具有序列互补性），去掉变性条件后复性形成双螺旋结构的过程。 核酸的理化性质 核酸的研究方法 核酸的分离纯化和定量测定 核酸的离心分析 核酸的凝胶电泳 核酸的测序 PCR DNA的化学合成 核酸的研究方法 核酸的分离纯化 要点： 利用各种核酸的特性选择合适的纯化方法（注意掌握原理）； 抑制核酸酶的作用，防止核酸的降解和变性。 核酸的研究方法 核酸的研究方法 A260=1 50 ?g/ml