三氧化二砷联合干扰素对人黑色素瘤细胞A375作用及其机制的研究.pdf

中文摘要 三氧化二砷联合干扰素对人恶性黑素瘤 细胞A375作用及其机制研究 摘 要 目的：恶性黑素瘤(malignant 生命的肿瘤，占皮肤恶性肿瘤的第三位。其恶性程度高、侵袭力极强，且 多发、易转移，患者的5年生存率极低。目前虽然外科手术仍是治疗恶性 黑素瘤的首选方法，但是即使外科手术切除，预后仍然较差。化疗效果亦 不佳，有效率低于25％。因此，寻求有效的药物治疗成为恶性黑素瘤治疗 领域的研究热点。 三氧化二砷(arsenic 砷用于慢性粒细胞性白血病和急性早幼粒细胞性白血病己取得良好的疗 效，其诱导恶性淋巴瘤、食管癌、肝癌、胰腺癌、胃癌和肺癌等细胞株凋 亡的研究也有报道，但As203对恶性黑素瘤相关研究报道很少。大量体外 实验表明三氧化二砷可能通过诱导细胞分化、阻滞细胞周期、抗肿瘤血管 生成及调节多种基因表达及诱导肿瘤细胞凋亡而发挥其抗肿瘤作用。其作 用机理尚不明确，As203是否能用于恶性黑色素瘤的临床治疗，有待进一步 研究。 干扰素具有抗肿瘤和免疫调节作用，三氧化二砷和干扰素分别属于外 源性和内源性的分化诱导剂，二者联合应用，有可能提高肿瘤对诱导剂的 敏感性，增强抗肿瘤作用，从而降低单药剂量，减少毒副作用，从而提高 治疗效果。这在皮肤恶性黑素瘤方面的研究未见报道。 and phosphorylation PPO(proliferation oncogene)基因是一个新的癌基 多种恶性肿瘤癌组织及细胞株中都有过表达，与细胞增殖关系密切，且该 ERK2磷酸化，MAPK通路是癌症发生的重要通路，因而该基因与多种 癌症的形成有密切关系。 三氧化二砷及干扰素抗皮肤恶性黑素瘤的机制尚未完全阐明。本研究 中文摘要 采用恶性黑色素瘤人A375细胞作为工作模型，探讨三氧化二砷、干扰素 在不同浓度、不同作用时间对皮肤黑色素瘤细胞增殖抑制作用及形态分化 的影响，筛选两药联合应用的最佳作用时间和剂量；探讨两药联合应用对 人A375细胞表达的癌基因PPO的影响。为干扰素、三氧化二砷类药物 诱导皮肤肿瘤细胞凋亡的基础研究及恶性黑色素瘤的治疗提供新的理论 和实验依据。 方法： 1细胞培养 的培养箱内常规传代培养。 2 MTT比色分析法检测三氧化二砷和干扰素对人A375细胞增殖抑制的 影响。 24、48、72小时后对A375细胞增殖的影响。 、72小时后对A375细胞增殖的影响。 对A375细胞增殖的影响，采用金氏公式分析相互作用指数(q)，评价联 合后的效应。 3倒置相差显微镜观察各组药物处理后对人A375细胞的细胞分化及形态 的影响。 4采用流式细胞分析术，检测人A375细胞的细胞周期变化和凋亡的发生， 将实验分为4组，分别为阴性对照组(不加任何药物)、三氧化二砷组 组(1万u／m1)。各组药物干预48小时后，收集各组别细胞，用流式细胞仪 检测细胞凋亡及周期分布情况。 表达情况。 6运用统计软件SPSSl3．0对数据进行统计处理，采用单因素方差分析， 中文摘要 以a=0．05为差异显著性标准。 结果： l未经药物处理过的人A375细胞呈梭形或多角形，贴壁生长，分布均匀， 大小基本一致，增殖旺盛，核固缩现象少见。 2 MTT比色分析法检测处理因素对人A375细胞增殖的影响(相对抑制 率)。 2．1三氧化二砷组各组间差别具有显著性(pO．05)。不同浓度的三氧 化二砷对人A375细胞的抑制作用呈现明显的剂量依赖效应关系和时间依 赖效应关系。 2．2干扰素组各组间差别具有显著性(pO．05)。不同浓度的干扰素对 人A375细胞的抑制作用呈现较明显的剂量依赖效应和时间依赖效应关 系。 2．3三氧化二砷联合干扰素组 将实验分为4组，分别为阴性对照组(不加任何药物)，三氧化二砷 素组(1万u／m1)。三氧化二砷和干扰素联合应用可抑制A375细胞增殖， 与三氧化二砷或干扰素单独应用比较，差异有显著性(pO．05)。金氏公 式分析表明三氧化二砷与干扰素联合应用对A375细胞有协同的抑制作 用。 3三氧化二砷及干扰素对A375细胞分化及形态的影响 阴性对照组细胞呈梭形或多角形，贴壁生长，