第十章核酸的酶促降解和核苷酸代谢.ppt

外切核酸酶对核酸的水解位点 内切核酸酶对RNA的水解位点示意图 限制性内切酶的命名 什么是痛风症？ 痛风症：由于体内嘌呤核苷酸分解代谢异常，可致血中尿酸水平升高，以尿酸钠晶体沉积于软骨、关节、软组织及肾脏，临床上表现为皮下结节，关节疼痛等。 尿嘧啶核苷酸生物合成过程（从头合成） 胞嘧啶核苷酸是在尿苷三磷酸水平上由 Gln 提供氨基转变而成。 2.胞嘧啶核苷酸的生物合成 在 DNA 中的胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTMP)，它由dUMP 在 dTMP 合成酶的催化下甲基化生成。 3.胸腺嘧啶核苷酸的生物合成 三、核苷酸合成的补救途径 生物体中存在许多催化嘌呤碱基和嘧啶碱基合成单核苷酸的酶，这样可以使核酸降解产物或外源补充的碱基得到直接利用。 1.嘌呤碱的直接利用 催化嘌呤直接转化成核苷酸的酶主要有两种: 腺嘌呤磷酸核糖转移酶 次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 合 成 过 程 腺嘌呤磷酸核糖转移酶 次黄嘌呤－鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 补 救 合 成 的 生 理 意 义 补救合成途径可以节省从头合成途径时所需的能量和一些氨基酸的消耗。 体内某些组织器官，如脑、骨髓等只能进行补救合成。 自毁损伤：大脑中次黄嘌呤核苷酸和鸟嘌呤核苷酸的合成主要依赖补救合成途径，患者由于脑组织中缺乏次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶，使补救合成途径受阻，导致中枢神经系统功能失常，自我损伤。 在尿嘧啶磷酸核糖转移酶的催化下，可将尿嘧啶转变成尿苷酸： 2.嘧啶碱的直接利用 尿嘧啶+PRPP UMP+PPi 尿嘧啶磷酸核糖转移酶 目前还未发现有胞嘧啶磷酸核糖转移酶，可能不能通过此途径合成胞苷酸。 核苷可直接转变成核苷酸加以利用。碱基也可以通过核苷磷酸化酶生成核苷，再转变成核苷酸。 3.核苷的直接利用 生物体内存在各种核苷激酶催化各种核苷生成核苷酸。 碱基 + R-1-P 核苷+Pi 核苷磷酸化酶 腺苷 + ATP AMP + ADP 腺苷激酶 尿(胞)苷 + (d)NTP UMP(CMP) + (d)NDP 尿苷-胞苷激酶 * 第十章 核酸的酶促降解和核苷酸代谢 第一节 核酸的酶促降解 核酸酶 依据底物不同分类 依据切割位点不同分类 核酸 内切酶 核酸 外切酶 RNA酶(RNase):专一降解RNA的酶 DNA酶(DNase):专一降解DNA的酶 一、核酸酶 水解核酸链中磷酸二酯键的酶, 核酸酶既可作用于RNA，也可作用于DNA 。 （一）核酸外切酶 作用于核苷酸链的一端，逐个水解下核苷酸。 是非特异性的磷酸二酯键 3’-核酸外切酶：从3’-OH 端开始，生成5’- 单 核苷酸，如蛇毒磷酸二酯酶。 5’-核酸外切酶：从5’-OH 端开始，生成3’-单核苷酸，如牛脾磷酸二酯酶。 5′ p p p p OH B p p p p 3′ B B B B B B B 牛脾磷酸二酯酶 （ 5?端外切产生3?-核苷酸） 蛇毒磷酸二酯酶 （ 3′端外切产生5?-核苷酸） 特异地水解多核苷酸链内部各键 （二）核酸内切酶 特异性磷酸二酯酶 5′ p p p p OH Py Pu Py Py 1′ p p p G A C U p p p G A 3′ RNAase I RNAase I RNAase T1 RNAase T1 Pu ：嘌呤 Py：嘧啶 牛胰核酸酶（牛胰 RNase） 作用于嘧啶核苷酸的磷酸二酯键，其专一作用于 RNA，对 DNA 不作用。 核酸酶促水解作用部位 脱氧核糖核酸酶专一水解 DNA ，作用方式作为内切酶，切断双链，或切断单链，作为外切酶有 5′ 3′切割或是 3′ 5′切割。 二、脱氧核糖核酸酶 如牛胰脱氧核糖核酸酶 ( DNaseⅠ），可切割双链和单链 DNA ，产物为 5′-磷酸为末端的寡核苷酸。 三、限制性内切酶 限制性内切酶主要是从细菌中分离得到，能识别特定的核苷酸顺序，细菌自身的DNA序列已被甲基化（甲基化酶），不会被水解。因此这些酶仅限于水解外源 DNA 以保护自身，故称为“限制性”酶。 限制酶具有很强的专一性。对DNA有特异的识别位点（或称识别序列）。这些位点的长度一般在 4-8 碱基对范围内。通常具有回文结构，切割后形成粘性末端或平齐末端。 限制性内切酶 EcoR V 5’-GAT?ATC-3’