05实验五 果蝇饲养与杂交综合实验.pptVIP

实验五 果蝇饲养和杂交综合实验 实验项目：果蝇饲养和杂交综合实验 实验学时：6 学时 实验类型：综合性 每组人数： 4 人／组 一、实验目的 本实验综合了遗传学实验课程中的果蝇实验室饲养和三个有性杂交实验。 1．熟悉果蝇材料的动物学特性、果蝇食性和生活习性、遗传性状识别； 2．掌握果蝇的饲养管理技术和有性杂交实验技术； 3．掌握杂交结果的统计分析和检验等方法； 4 ．检验孟德尔分离和自由组合定律； 5 ．明确伴性遗传和非性连锁基因的遗传方式之异同。 二、实验要求 掌握制备果蝇培养基的基本方法和果蝇的饲养管理技术，学习并掌握果蝇杂交实验技术； 通过杂交实验，验证基因分离规律、自由组合规律，加深对遗传学基本规律的理解； 分析伴性遗传的主要特点，了解伴性遗传和非伴性遗传之区别及其遗传方式之异同，理解伴性基因在正反交中的差异； 掌握实验结果的数据取得和统计学处理方法。 三、实验主要仪器和制剂 恒温培养箱，超净工作台，显微镜； 培养瓶，麻醉瓶，白瓷板，毛笔，标签纸，乙醚； 黑檀体果蝇，白色复眼果蝇。 四、实验内容 1．原种亲本果蝇品系纯化后，收集处女蝇，分别设计正反交杂交组合； 2．定时观察，成蝇羽化后记录正、反交子一代果蝇性状数目； 3．子一代互交，定时观察，记录子二代正、反交结果； 4．验证孟德尔遗传定律；分析伴性遗传的主要特点；撰写实验报告。 五、实验实施步骤 1．亲本果蝇的饲养（原种培养） 留种培养时，需要选取纯合基因型的个体作亲本，每瓶2对。将果蝇麻醉后，用毛笔轻轻扫入新制培养基的培养瓶内，待果蝇清醒后再将培养瓶竖起，以防果蝇粘在培养基上，每种保留两套原种，贴好标签（种名，基因型和日期等）。 原种培养或长期保种宜低温（10～15℃）培养；杂交实验培养温度20～25℃恒温培养，避免阳光直射。 2．收集处女蝇并进行杂交组合 杂交实验前需要收集纯合体处女蝇与纯合雄性果蝇。将亲本成蝇移出培养瓶后，再过8～12小时内所收集到的新羽化的雌性果蝇，即为处女蝇。对新羽化的果蝇作雌雄鉴定，然后分别饲养。为杂交试验做准备。 控制黑檀体（e）突变型的基因位于第三号染色体上，控制白色复眼（w）、的基因位于X染色体上。 故可利用E/e这对常染色体上的等位基因作单因子杂交组合，利用E/e 和X+/Xw两对等位基因作双因子杂交组合，用位于X染色体上一对等位基因 X+/Xw 作伴性遗传验证实验。 可选取白色复眼果蝇与黑檀体果蝇作杂交组合，正反交各一，贴好标签（世代、杂交组合、日期、姓名），置于25℃恒温培养箱中培养。 3．弃亲本蝇，观察子一代 培养7～8天后可以看到F1代幼虫出现，倒去亲本果蝇并处死，再过2～3天，F1代成蝇出现； 观察F1代果蝇的表型，统计各种性别和表型成蝇的数目，连续检查3～4次（约9天左右，数量大约150～200只）。 如发现F1代成蝇不符合预期结果，则说明杂交组合出现错误，不必继续，寻找出错原因。 4．子一代互交 麻醉F1代成蝇，对应正反交组合各选取雌雄果蝇各2～3只移入新的培养瓶，开始第二代杂交（F1代互交）； 贴好标签（世代、交配组合、日期、姓名等）。置于25℃恒温培养箱中培养。 5．弃F1亲本蝇，观察子二代 过7～8天后，F2代幼虫出现，倒掉F1代成蝇，继续培养2～3天后，F2代成蝇出现，即可开始观察统计F2代成蝇。 按照实验目的自行设计表格分性别、表型和日期进行统计，每2天一次，共观察统计4～5次（约9天）。 F2果蝇总数不少于250只，最理想的是超过500只。 6．杂交结果统计分析 对统计结果进行统计学分析和检验，验证孟德尔遗传定律； 分析伴性遗传和非伴性遗传的遗传方式之异同。 六、思考问题 哪些因素会影响果蝇的发育周期？ 杂交实验为何取25℃来培养果蝇？ 收集处女蝇的目的和意义？ 正交、反交的结果是否相同？为什么？ 哪一杂交组合宜于验证自由组合规律？ 统计群体足够大的意义？ * *