气单胞菌毒力基因及其表达的影响因素的研究.pdfVIP

为深入的嗜水气单胞菌的毒力基因之一，在GenBank中可以搜索到40多条嗜水气 单胞菌气溶素基因的部分或全序列。该基因编码的气溶素AerA是细胞通道形成 1．1．2．2．溶血素(Hemolysin) 溶血素能破坏各种细胞(包括白细胞)，这种损伤是不可逆转的，它在0-37C ， 都可以结合在细胞膜上。纯化的溶血素无宿主特异性，可对动物致死，例如， pg／g。 Rose等‘171纯化的毒素(有溶血性)在lmin内致死小白鼠，其致死剂量小于l 溶血素在致病过程中的毒性作用已经证实，但其活性和细菌致病性之间没有正相 关的关系，因此，邱德全等【18】认为在一些动物中溶血素的作用不如细胞毒素突出。 ● Enterotoxin，Act) 1．1．2．3．细胞毒肠毒素(Cytotoxic 细胞毒肠毒素为54．5kD蛋白质，该蛋白为细胞肠毒素(Act)的前体形式，并 含有一段23个氨基酸的导肽，成熟的Act为52kD的蛋白，属于孔形成毒素， 与气溶素基因具有73．1．96．7％的相似性。Act具有多功能活性，兼具溶血性、细 胞毒性、肠毒性和致死性。细胞毒肠毒素使组织细胞溶解和破裂。Rose等¨¨观 察到嗜水气单胞菌分泌的毒素使各种细胞形成孔洞，中国仓鼠卵巢细胞膜在细胞 毒素原作用下围绕细胞核皱缩、破裂并释放细胞内容物。 大多数细胞毒素同时具有溶血性，使红细胞形成空洞。同时，细胞毒素还影 响细胞的代谢(如生长、代谢酶、培养液pH、蛋白质结合、核酸的代谢)，但它 与气溶素不同的是，它不能与红细胞上气溶素受体．血型糖蛋[刍(Glycophorin)结合。 外毒素的溶血作用包括“结合．聚合．插入”三个步骤。毒素单体首先结合到 红细胞膜表面的特殊糖蛋白受体上，很快进行聚合作用形成六聚体，聚合体插入 细胞膜、破坏细胞膜的渗透屏障作用，最终导致细胞破裂死亡，使病鱼血液处于 低凝状态，表现出全身性出血的症状。 1．1．2．4．细胞兴奋性肠毒素(CytotonicEnterotoxin) 嗜水气单胞菌含有2种类型的细胞兴奋性肠毒素基因，对56℃处理敏感的 71kD，等电点为6．9)。它们和细胞毒肠毒素不一样，可使细胞由圆变长、变大， 并产生cAMP，这属于典型的肠毒素反应，当然，它们在兔肠段结扎试验中均可 引起积水。细胞兴奋性肠毒素在兔的肠绊不引起粘膜损伤，但是导致液体积累， 所聚集液体的电解质内容和霍乱作用的结果相似。 肠道内的嗜水气单胞菌导致的腹泻性病，容易为抗菌素抑制。个别动物在 大量感染嗜水气单胞茵时，肠道内肠毒素量大，与细胞不可逆结合，使体液大量 81。 损失，导致死亡【1 ， 1．1．3．S层蛋白(S—Layerprotein) S层蛋白象荚膜一样位于细菌表面的最外层，完整地包裹着细菌的菌体，它 是由单一的蛋白质亚单位呈四边形规则排列起来的一种类晶格结构，晶格之间有 一定的间隙，所以表现为多孔性。 S层蛋白是一种相对分子量为51．52kD，p14．6的单一多肽，含有大量的酸性 氨基酸和非极性氨基酸，具有显著的疏水性，并借此自我组装成层，主要起保护 性屏障作用，同时还具有保持细胞完整性，抵抗宿主血清作用，抗吞噬细胞和补 体介导的细胞溶解等作用。S层蛋白的分子量虽与外毒素相近，但并非同一物质 121]。现有研究表明，大部分的强毒株都具有S层，S层蛋白z日‘匕l-,够增强嗜水气单胞 菌的致病性，但奇怪的是S层蛋白对小鼠并没有直接的致死性[19,20】。 嗜水气单胞菌的s层蛋白对细菌入侵动物组织有重要作用，Kokka掣19】也通 过免疫化学分析证实了S层蛋白在细菌通过胃肠粘膜入侵后的扩散及致病过程 中有重要的作用。在感染嗜水气单胞菌的病人身上有强的对S蛋白的体液免疫反 应，说明S蛋白的免疫原性是较强的，也提示它在感染中的作用。多年研究的结 论认为S蛋白在嗜水气单胞菌自我保护和入侵过程中有重要作用，但不是主要的 致病因子。 1．1．4．胞外蛋白酶(ExtracellarProtease，ECPase) 胞外蛋白酶是嗜水气单胞菌胞外产物的