九香止泻肠溶片对副溶血弧菌活性及小肠功能亢进模型小鼠影响.doc

九香止泻肠溶片对副溶血弧菌活性及小肠功能亢进模型小鼠影响 　 作者：彭芝配，滕久祥，尹进，伍参荣 【摘要】; 目的 探讨九香止泻肠溶片对副溶血弧菌活性以及对新斯的明所致的小鼠小肠功能亢进影响。方法 采用琼脂扩散法测定抑菌圈直径，液体培基测定法与平皿倾注法测定最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）；皮下注射甲硫酸新斯的明0.15 mg/kg造模，灌胃10％炭末生理盐水，测定小肠推进率。结果 九香止泻肠溶片在50 mg/mL浓度对副溶血弧菌表现出较强的抗菌作用，其作用优于肠康片（Plt;0.01），其MIC为50 mg/mL,MBC为500mg/ mL；与模型组比较，九香止泻肠溶片各剂量组小肠推进率显著降低（Plt;0.05）；其中、高剂量组明显优于肠康组（Plt;0.05）。结论 结果提示九香止泻肠溶片具有显著的抗副溶血弧菌活性、抑制小肠功能亢进作用。 【关键词】; 九香止泻肠溶片；海洋弧菌；抗菌；新斯的明；小肠推进率；小鼠；秦皮；香椿皮 ; 急性腹泻的发病原因多为感染性腹泻，细菌感染引起的腹泻占感染性腹泻多数。致泻性海洋弧菌引起的急性腹泻发病率呈上升趋势。副溶血弧菌就是其中一种致泻性海洋弧菌。九香止泻肠溶片主治湿热泻泄，其临床疗效确切、安全。拟九香止泻肠溶片对副溶血弧菌抗菌活性影响及其对新斯的明引起的小鼠小肠功能亢进模型的影响进行研究。现将实验方法及结果报告如下。 ; 1 材料与方法 ; 1.1; 材料 ; 1.1.1; 药物; 九香止泻肠溶片干浸膏由湖南中医药大学药学院药剂教研室提供。药品浓度为每克浸膏含5 g生药,批号临床推荐剂量为3 g生药/次，3次/d，3 d为1疗程。肠康片，湖南湘泉制药有限公司生产，批号诺氟沙星胶囊，福建古田药业有限公司生产，批号：060106-4。甲硫酸新斯的明注射液，上海信谊金朱药业有限公司生产，批号：030501。 ; 1.1.2; 动物; 昆明种小鼠, 雌雄各半，体质量18～22 g，由湖南农业大学动物科技学院实验动物养殖场提供。许可证号码: SCXK(湘)2003-0003。实验用小鼠均在日常条件下饲养 3 d 后进行试验。 ; 1.1.3; 菌种; 副溶血弧菌由湖南省商品进出口检验检疫局食品检验检疫科提供,购自大连海事检验中心，批号 ; 1.1.4; 试剂与仪器; 琼脂；NaCL；墨汁；无菌注射用水；生物显微镜；超净工作台；血球计数板；抗菌实验用琼脂打孔器（Φ6 mm）；柳叶刀；游标卡尺等。 ; 1.2; 方法 ; 1.2.1; 九香止泻肠溶片对致泻性海洋弧菌的检测方法[1]; （1）菌液制备 将副溶血弧菌菌种在3.5％ NaCl肉汤琼脂培养基中增菌，37℃培养，取对数生长的菌液。使用时用麦氏计数法，将菌液浓度调整为1×109个/mL。（2）抑菌实验; 采用琼脂扩散法（打孔法）。制备我妻氏血琼脂平板，无菌检查后，进行抗菌实验：取0.1mL副溶血弧菌菌液（菌液浓度为1.5×109cfu/ mL）均匀涂布整个培养基表面，用直径6 mm无菌打孔器在我妻氏血琼脂平板的表面打孔，每个平板上打3孔，各孔中心相距约24 mm，每孔加入300 μL药液（药液浓度为1 g/mL），于37 ℃培养24 h后，观察抑菌圈的有无，用游标卡尺准确量取抑菌圈直径。同样操作重复9次。同时设诺氟沙星胶囊和肠康片对照孔。（3）药物的MIC测定; ①采用液体培基测定法测定药物的MIC. 制备3.5% NaCl肉汤培养基：NaCl 3.5 g加入布氏肉汤培基 100 mL中即得。加热溶解，分装于试管，每管1 mL，121 ℃、1.05 kg/cm2高压灭菌15 min备用。②将九香止泻肠溶片无菌干粉用注射用无菌用水溶解成1 g/mL，实验用3.5% NaCl肉汤培养基将药液进行对倍稀释1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，1∶256，1∶512，1∶1024，共10管。同时设含菌不加药的菌液对照，加药不加菌的药物对照，不加菌不加药的培养基对照。③每管加入0.05 mL副溶血弧菌菌液，37 ℃、24 h培养，肉眼观察，以能抑制细菌生长的最高药物稀释倍数即为最低抑菌浓度（MIC）。（4）药物的MBC测定; 取MIC以上无细菌生长的培养物0.1 mL，倾注于不含药物的我妻氏血琼脂培养基，待培基冷凝后，37 ℃培养24 h，观察有无细菌生长，以无菌生长的浓度即为药物的最低杀菌浓度（MBC）。 ; 1.2.2; 九香止泻肠溶片对新斯的明所致的小鼠小肠功能亢进的实验方法[2]; （1） 动物分组及给药方法; 取小鼠60只，雌雄各半，编号、称体质量后，按体质量排序，性别、体质量分层后按随机数字表法随机分为6组：空白对照组