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仪器法及手工法网织红细胞计数对比分析 　 作者：龚永启，蒋玉叶，刘更夫，胡芳，左芳 【摘要】 目的：比较仪器法与手工法网织红细胞（Ret）计数差异情况。方法：EDTAK2抗凝全血标本分别采用仪器法和手工法（显微镜）作Ret计数。结果：仪器法和手工法Ret计数结果差异均无显著性（P＞0.05），但Hb含量在90 g/L～110 g/L之间的血液标本采用仪器法Ret计数时，有35%的患者超过正常参考范围，有2.4%的患者低于正常参考范围。结论：仪器法较手工法Ret计数方便、快捷、重复性好、准确性高、结果稳定，在大、中型医疗机构中可广泛应用。另外应加大临床上轻度贫血患者Ret检查的力度，以防漏诊。 【关键词】 仪器法；手工法；网织红细胞 　　目前，基层大多数医院的网织红细胞(Ret)计数，仍然使用传统的显微镜计数方法，此方法操作较烦琐，影响结果的因素较多，既费时，又费精力，工作量大，而仪器法操作简单，时间短，重复性好，结果准确，笔者就仪器法与手工法计数Ret作比较分析，现报告如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 仪器与试剂 日本希森美康公司生产的Sysmex SE9000全自动血液分析仪及进口配套Ret试剂及质控物，所有试剂均在有效期内使用。 　　1.1.2 标本来源 本病例均为我院2006年7月至8月间的住院患者，其中有血液内科、肾内科、妇科、产科、消化内科、肝肠科等各科住院患者标本。 　　1.2 方法 患者标本用EDTAK2真空抗凝管抽血2 ml。仪器在测定前自动校准，待各项检测参数在允许的范围之内应进行室内质控物监控，最后测定Ret，结果备用。作仪器法Ret计数的同时，用珠海贝索生物技术有限公司提供的10 g/L煌焦油蓝染液与血液1∶1比例于刻度离心管中进行20 min的染色后推片备用。显微镜计数前，目镜放置米勒窥盘，以提高计数速度和准确性。本镜检实验由5位技术熟练工作人员操作，统一计数方法和计数标准，要求涂片均匀，厚薄适宜，每份标本选2张血膜片，血膜长约3 cm，选择染色深浅适中。遇有异常细胞须经多人共同商议确定。计数时选择涂片体尾相交处细胞展开良好，分散较均匀的部位，由近边到中心顺序计数，避免重复或遗漏。人工显微镜测定油镜下计数1 000个红细胞中的Ret数，以百分率表示［1］。 　　1.3 统计方法 采用t检验。 　　　2 结果 　　2.1 计数人员间差异性比较 取20份Hb在111 g/L～150 g/L之间的全血标本作Ret计数，选7名工作人员计数，从中选取5名人员计数结果差异较小的参与手工法与仪器法Ret比较，结果见表1。 　　表1 人与人之间Ret计数差异比较（略） 　　注：1～5之间比较P＞0.05；6、7与1～5比较P＜0.05。 　　2.2 仪器法与手工法Ret计数重复性比较 仪器法与手工法对质控物，患者全血标本作平行实验，质控物为A组，Ret在0.5%～1.5%范围为B组，Ret计数＞1.5%为C组，仪器法A、B、C各检测20份标本，手工法相对应的编为A、B、C组，5位工作人员操作每份标本各工作人员操作2张血膜片结果取均值。将5位人员各自的均值去掉最高值和最低值后再均值作为手工法结果A、B、C。仪器法与手工法Ret数据基本接近差异无显著性（P＞0.05），不过手工法的CV值大于仪器法CV值，说明仪器法测定结果重复性更好，其结果见表2。 　　表2 仪器法与手工法Ret重复性比较（略） 　　注：仪器法与手工法Ret结果两组比较P＞0.05。 　　2.3 选Hb在90 g/L～110 g/L之间235例作Ret计数，有35%的人超过正常参考值，约有2.4%人低于正常参考值。 　　3 讨论 　　仪器法Ret计数与一般血细胞分析仪原理一样，均为流式细胞术中的鞘流技术，射频技术。由于激光束可摄入红细胞内容物的分析，而Ret是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间尚未成熟的红细胞，其胞浆内含有一定量RNA，经染色后可显示网织结构，且与形式和RNA含量有关［2］。根据这一原理可将Ret分为：早期Ret（HFR）、中期Ret（MFR）和晚期Ret（LFR），它们比率的高低，组合比例的高低对贫血的诊断和鉴别诊断，贫血的疗效观察，肿瘤治疗过程中起着决定性的重要作用。Ret计数仪可得出Ret结果的相对值和绝对值，计数速度快、时间短、重复性好、结果准确可靠。通过对40份全血标本作仪器法与手工法Ret计数结果比较差异无显著性（P＞0.05），质控物结果也在允许范围之内。当然存在不足的是，此仪器成本高，价格贵，基层医疗单位投入较为困难。手工Ret计数以试管法重复性较好，容易掌握，被列为手工法Ret计数的参考方法［3］。近年来使用了米勒窥盘计数，规范了计数区域，减少了实验误差，使结果的准确性有所提高。本次实验手工