多波长单因变量偏最小二回归校正法在他莫昔芬高效液相定量分析中.docVIP

多波长单因变量偏最小二回归校正法在他莫昔芬高效液相定量分析中 　【摘要】 　　使用偏最小二回归校正法处理他莫昔芬高效液相定量分析数据得到他莫昔芬的多波长标准方程，并将其与传统的单波长标准方程进行比较。结果显示多波长标准方程的平方相关系数大于单波长标准方程的平方相关系数，而多波长标准方程预测标准误小于单波长标准方程。 【关键词】 高效液相　多波长　偏最小二回归　标准方程 　　Application of Partial Least Squares Regression Method to HPLC Data of Tomaxi 　　Abstract In this study, the HPLC multiwavelength data of tamoxifen was processed by using partial least squares regression method, and the calibration equation was aquired. Then it was comapared with the traditional single wavelength calibration equation, results showed that correlation coefficient of multiwavelength equation is more than single wavelength equation’s, but the standard errors of prediction are less. Key words HPLC; multiwavelength; partial least squares regression; calibration equation 　　作为20世纪70年代以来发展最为迅速和应用最为广泛的分离分析技术之一，高效液相色谱法已被广泛地应用在有机、高分子、生物大分子和药物的定性与定量分析中［1］ ，它具有高准确度、高灵敏性、重复性好的优点［2］。传统的高效液相定量方法使用选定单波长下测得的峰面积构建线性回归方程［3］，其校正方法的数学模型如下［4］：A=+e=b+k·C+e(1) 　　其中A是色谱峰面积或者色谱峰高度测量值，是色谱峰面积或者色谱峰高度真实值，e是色谱峰面积或者色谱峰高度的误差，b是截距，k是常数，C是待测物浓度测量值。这个模型假定测量的误差主要来源于色谱峰的测量误差e，而待测物浓度误差则假定可忽略不计。这种方法有两个不适之处：一是这种方法的校正目的是利用待测浓度来确定色谱峰面积或峰高,实际我们需要的是根据色谱峰面积和色谱峰高来测定待测物浓度;二是误差来源。色谱峰面积或者色谱峰高的误差主要受高效液相性能影响，而随着科技进步，高效液相越来越精密，因仪器性能引起的误差与容量瓶、称量天平、进样器等引起的浓度误差相比越来越小［5］。因此我们建议校正模型应更改为以下公式 ： 　　C=+fA=+e　=b+k·（2） 　　其中e、f分别是色谱峰面积或峰高测量值A和待测物浓度测量值C的误差，色谱峰面积或者色谱峰高度真实值，待测物浓度真实值。我们希望根据测量观测值找到一组截距b和常数k，使得色谱峰或者色谱峰高的误差e和浓度测量误差f均最小。 使用单波长标准方程的另一缺点是要预先确定待测物的最大吸收波长，而在高效液相色谱条件下为了准确找到最大吸收波长往往会增加色谱法定量分析的工作量。此外在药物的体内药物分析中常常有未知的微量药物代谢产物，因其结构与待测物相似且结构未知，常常干扰待测物的测定。而同时使用多波长校正方法处理DAD检测器测得的数据，既可减少色谱法定量分析的工作量，又可因不同波长数据可能含有不同信息而获得更好的测定结果［5］。 在我们的研究中分别使用偏最小二回归校正法和传统的单波长校正法处理DAD检测器在多波长和单波长下采集的他莫昔芬高效液相色谱法数据，并使用交互验证（cross validation）和验证集预测法检验标准方程，结果证明多波长偏最小二回归校正方法是一个很好的，可替代传统单波长校正法的高效液相定量分析校正方法。 　　1 原理 在5个波长处测定不同浓度（C1×7）的标准溶液，得到一组色谱响应值（A5×7）。可用以下矩阵方程表示它们之间的关系：A1×1…A1×7　　A5×1…A5×7=k1×1　k5×1·［C1×1 … C1×7］（3）即 A6×6=k6×1·C1×6（4） 可得到 k6×1=A6×6CT1×6［C1×6CT1×6］-1(5) 对公式（3）变换可得到浓度的表达式：C1×6=k′1×6A6×6(6)其中k′1×6=［kT6×1k6×1］-1kT6×1 　　上式表明浓度预测值可用不同波长处测得的色谱响应