微柱凝胶法在新生儿溶血病IgG抗体效价检测中应用及方法学探析.docVIP

微柱凝胶法在新生儿溶血病IgG抗体效价检测中应用及方法学探析 　【摘要】 目的：探讨微柱凝胶法在新生儿溶血病实验诊断中测定孕妇血清中IgG抗体效价的可行性及方法学。方法：孕妇血清用2-Me处理做倍量稀释后，采用微柱凝胶法测定IgG抗体效价。同时与试管法进行对照比较。结果：用微柱凝胶法和试管法同时检测孕妇血清中的IgG抗体效价，其结果符合率为84．5％(93／110)，其中IgG抗体效价lt;64时符合率为85，4％(70／82)，IgG抗体效价≥64时符合率为82．1％(23／28)。两种方法检测孕妇血清IgG抗体效价结果差异无显著性(Pgt;0．05)。结论：应用微柱凝胶法测定孕妇血清IgG抗体效价，能够使实验方法简单化、自动化，使实验操作标准化，判读结果直观、与试管法相比减少了肉眼判读结果时的人为误差。方法灵敏度高，结果准确可靠。 【关键词】 微柱凝胶法；IgG抗体效价；方法学 　　1 材料与方法 　　1．1 检测对象 2005年8月至2006年9月在本院门诊围产保健及住院待产的孕妇110例，年龄在23周岁～35周岁，孕妇ABO血型均为O型，且丈夫血型为A型、B型或AB型。 　　1.2 实验仪器及试剂 DiaMed-ID卡式血型配血系统(ID-Centrifuge 12 SⅡ离心机和ID-Incubator 37 SⅠ保温孵育器购自瑞士达亚美公司)，达亚美Liss／coobs卡，抗人球蛋白试剂(购自上海血液生物医药有限责任公司)。 　　1．3 检测方法 　　1．3．1 采用微柱凝胶法对受检孕妇血清进行IgG抗体效价测定 抽取受检孕妇血标本5 ml，置37 ℃水浴10 min，离心分离血清与红细胞。取试管一支，加受检孕妇血清0．2 ml及2-me试剂0．2 ml，混合加塞，置37 ℃水浴30 min进行处理，以充分破坏血清中的IgM类抗体。另取6支干净试管，置于试打架上，第一支试管加处理后的血清50 μl和盐水350 μl混匀。第2支至第6支试管分别加入200 μl盐水。从第1支试管中吸取200 μlul液体加入第2试管中混匀，再从第2支试管中吸取200 μl液体加入第3支试管中混匀，依次倍量稀释(第1管～第6管稀释倍数依次为1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512)。取达亚美Liss／coombs卡(一卡六管)一张，撕去铝箔，6管中各加父亲1％红细胞悬液50 μl。从第1支～第6支试管中各取25 μl液体分别加入达亚美Liss／coombs卡的6管中。将加好样的达亚美Liss／coombs卡置于ID-Incubatre 37 SⅠ保温孵育器内，孵育15 min，将孵育好的Liss／coombs卡置ID-Centrifuge 12 SⅡ离心机内离心15 min。判读结果：出现1+的最高管稀释度的倒数即为IgG抗体效价。 　　1．3．2 采用试管法对同一受检孕妇血清进行IgG抗体效价测定 取干净试管8支置于试管架上，分别加入200 μl盐水，第1支试管加入上述处理过的血清200 μl混匀，从第1支试管中吸取200 μl液体加入第2支试管中混匀，再从第2支试管中吸取200 μl液体加入第3支试管中混匀，依次倍量稀释。其余操作步骤按照《全国临床检验操作规程》一书中的IgG抗A(B)测定进行［1］。 　　2 结果 　　2．1 两种方法检测 对2005年8月至2006年9月在我院围产保健及住院待产的110例孕妇血清IgG抗体效价用微柱凝胶法和试管法同时检测，其检测结果见表1。 　　　表1 110例孕妇血清IgG抗体效价两种方法检测结果(略) 　　2．2 采用微柱凝胶法 测得110例孕妇血清IgG抗体效价结果与试管法比较，结果符合率为84．5％(93／110)，其中IgG抗体效价lt;64时结果符合率为85．4％(70／82)、IgG抗体效价≥64时结果符合率为82．1％(23／28)。两种方法测定所得结果经统计学处理，微柱凝胶法IgG抗体效价几何均值为29．7，试管法IgG抗体效价几何均值为28．8。两种方法检测孕妇血清IgG抗体效价结果差异无显著性Pgt;0．05(轶和检验)。 　　3 讨论 　　 　　微柱凝胶试验是红细胞膜抗原与相应抗体在凝胶介质中发生的凝集反应，是一种免疫学检测技术［2］。微柱凝胶分中性胶、特异性胶和抗人球蛋白胶，本试验是用抗人球蛋白胶检测IgG不完全抗体和相应红细胞抗原的反应。本研究应用微柱凝胶法在HDN实验诊断中检测孕妇血清中IgG抗体效价，其检测结果与试管法检测结果一致。但试管法测定血清中IgG抗体效价时操作程序复杂，需要对红细胞经过反复洗涤后加入抗人球蛋白试剂观察凝集现象，洗涤费时，结果判断时人为因素干扰较大。而微柱凝胶法是通过调节凝胶的浓度来控制凝胶间隙的大小，使其间隙只能允许