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橘荔散结丸对子宫肌瘤组织雌激素受体表达水平影响 　 作者：李坤寅， 卢朝霞， 关永格， 王慧颖， 曾诚 【摘要】; 【目的】探讨橘荔散结丸对子宫肌瘤组织和子宫肌层组织雌激素受体（ER）α、β亚型表达水平的影响及作用机理。【方法】将40例患者分为2组，服用橘荔散结丸治疗后有手术指征且要求手术者20例为治疗组，未曾服用中西药物治疗而要求手术者20例为对照组。采用放射免疫法检测两组子宫肌瘤组织及周围正常子宫肌层组织的ERα、ERβ的表达水平。【结果】两组子宫肌瘤组织和子宫肌层组织均存在ERα、ERβ表达，且子宫肌瘤组织中ERα、ERβ的表达高于子宫肌层组织（P＜0.01），同时发现ERα在子宫肌瘤组织与子宫肌层组织中表达高于ERβ（P＜0.05）；而治疗组子宫肌瘤组织ERα、ERβ表达低于对照组（P＜0.01）；治疗组子宫肌层组织ERα表达低于对照组（P＜0.05），而两组子宫肌层组织ERβ表达水平比较差异无显著性意义（P＞0.05）。【结论】子宫肌瘤的发生与ERα、ERβ在子宫局部的表达相关；降低子宫肌瘤患者肌瘤组织中ERα、ERβ水平及子宫肌层ERα水平可能是橘荔散结丸治疗子宫肌瘤的主要机理之一。 【关键词】; 子宫肌瘤/中药疗法； 橘荔散结丸/治疗应用； 受体，雌激素/药物作用 子宫肌瘤是女性生殖器官中最常见的良性肿瘤，目前研究认为它是一种雌激素依赖性肿瘤，在生育期发生、发展，在绝经后逐渐萎缩，提示雌激素是子宫肌瘤生长的促进剂，而雌激素是通过其两种受体亚型（ERα、ERβ）发挥其生物学效应［1-2］。橘荔散结丸是已故全国著名妇科专家罗元恺教授所创制，临床应用20多年，疗效显著，我们前期研究［3-5］发现该药能明显改善患者临床症状，调控子宫肌瘤组织雌激素受体（estrogen receptor,ER）、孕激素受体（progesterone receptor ,PR）及PR mRNA的表达。为了进一步探讨其作用机理，明确ERα、ERβ亚型与子宫肌瘤的关系，我们于2007年1月至2008年3月进行了相关临床研究，现报道如下。 ; 1; 资料与方法 ; 1.1; 病例来源; 参考《女病诊疗全书》［6］中“中药新药治疗子宫肌瘤临床研究指导原则”的诊断、纳入和排除标准，选自2007年1月～2008年3月广州中医药大学第一附属医院妇科行全子宫切除术或子宫次全切术患者共40例，其中在门诊观察治疗服用橘荔散结丸1个疗程（３个月）有手术指征且要求手术者２０例为治疗组，未曾服用中西药物而要求手术者２０例为对照组。治疗组年龄３０～５２岁，平均（４０.７５±７.００）岁；病程1个月～8年，平均（2.17±1.0）年；肌瘤平均体积为（31.69±11.04)cm3。对照组年龄29～52岁，平均（37.9±6.37)岁，病程2个月～5年，平均（2.15±0.96)年；肌瘤平均体积为（26.62±5.80）cm3。两组患者的年龄、病程、肌瘤体积经统计学处理，差异无显著性意义（P＞0.05），具有可比性。 ; 1.2; 治疗方法; 治疗组：口服橘荔散结丸（药用橘核、荔枝核、川续断、小茴香、乌药、川楝子、海藻、莪术、制首乌、岗稔根、党参、生牡蛎、风粟壳、益母草等，由广州中医药大学第一附属医院制剂室制备），每次6粒，每天3次，以3个月为1个疗程，服用1个疗程后行手术治疗。 ; 对照组：未曾服用中西药物而直接行手术治疗。 ; 1.3; 观察指标 ; 1.3.1; 标本收集; 于术后取瘤体中心组织1.0 cm×1.0 cm×0.2 cm及其周围同样大小的正常肌层组织,用中性福尔马林固定。 ; 1.3.2; 试剂; 鼠抗人单克隆ERα、ERβ一抗抗体均购自广州威佳科技有限公司;PV6001兔二抗购自北京中杉生物技术有限公司。 ; 1.3.3; ERα、ERβ检测方法; 取出中性福尔马林固定的组织标本,石蜡包埋,5μm连续切片后常规脱蜡,流水冲流2min后用3%H2O2消耗内源性过氧化物酶10min,流水冲流后放入pH=6的枸橼酸抗原修复液高压锅中修复5min,待其自然冷却,再用PBS漂洗3次,每次5min,正常血清封闭,室温10min,加入鼠抗人单克隆ERα 1∶200,ERβ 1∶50，37.8℃反应1h后，加用一抗增敏剂反应30min，再用PBS漂洗3次，每次5min，加入生物素标记二抗，室温20min，用PBS漂洗3次，每次5min，DAB显色5min，自来水冲洗，苏木素浅染色，盐酸分化，氨水返蓝，吹风机封干，中性树胶封固，电镜下计算每100个组织细胞中黄染的细胞数（ERα、ERβ表现为细胞核染色），计为阳性细胞的百分数（ERα、ERβ阳性细胞数）。 ; 1.3.4; 结果判定; 按染色强度与阳性细胞的百分数判定分4级：不着色为阴性（-）；