白藜芦醇对鼻咽癌相关实验模型整体及离体药理作用探究.docVIP

白藜芦醇对鼻咽癌相关实验模型整体及离体药理作用探究 　　　　　　　　作者：文炳均，黄碧云，何展祥，吴树浓，黎连新，石胜，吴波 【摘要】 目的：了解白藜芦醇诱导大鼠鼻咽癌细胞CNE2 Z凋亡过程中半胱天冬酶6(caspase6)的活化情况。方法：采用实时PCR检测caspase6 mRNA表达的改变，比色法测定caspase6活性的变化。结果：采用不同浓度的白藜芦醇(0 μmol/L、30 μmol/L、60 μmol/L、120 μmol/L、240 μmol/L)处理小鼠鼻咽癌细胞24 h，caspase6 mRNA的表达呈浓度依赖性的增加(P＜0．01)；caspase6活性呈浓度和时间依赖性的升高(P＜0．01)。结论：白藜芦醇诱导小鼠鼻咽癌细胞CNE2 Z凋亡过程中存在caspaso6的活化。 【关键词】 白藜芦醇；细胞凋亡；鼻咽癌细胞；半胱天冬酶 　　Studies on the Pharmacologic Mechanism of Resveratrol on Rats with Nasopharyngeal Carcinoma 　　Abstract:Objective To investigate whether caspase6 was activated during resveratrol-induced apoptosis of rats’nasopharyngeal carcinoma cells CNE2Z.Methods The changes of caspase6 mRNA was detected by semi-quantitative RTPCR.The changes of caspase6 activity was determined by colorimetric assay.Results After CNE2Z cells were treated with 0 μmol/L，30 μmol/L，60 μmol/L，120 μmol/L，240 μmol/L resveratrol for 24 hours，respectively，the expression of caspsae6 mRNA was increased in a concentration-dependent manner(Plt;0.01).The caspase6 activity was increased in a concentration and time-dependent manner(Plt;0.01).Conclusion Caspase6 is activated during resveratrol-induced apoptosis of CNE2Z cells. 　　Key words:Resveratrol;Apoptosis;Nasopharyngeal carcinoma cells;Caspase 　　白藜芦醇为多酚类物质，是葡萄属植物产生的一种植物抗毒素，结构类似于雌激素乙底酚。白藜芦醇在植物中分布很广，含量较高，目前至少已经在70余种植物中发现了白藜芦醇。随着对白藜芦醇研究的深入，人们发现它具有多种药理活性，包括抗氧化活性、抗血小板聚集、抗动脉粥样硬化、抗炎、雌激素样活性、生长抑制活性、免疫调节及抗肿瘤活性等。近年来的研究［1～3］还发现：白藜芦醇可诱导人鼻咽癌低分化上皮细胞株CNE2 Z凋亡，且其凋亡过程中有caspase3的参与。本文将进一步探讨白藜芦醇诱导大鼠鼻咽癌细胞CNE2 Z凋亡过程中是否有caspase6的活化，对caspase6 mRNA的表达及其活性变化进行了分析，现报道如下。 　　1 材料与方法 　　1．1 材料 实验用鼻咽癌大鼠27只(3月龄同系)，体重(235±17)g，雌雄不拘，全部由中山大学实验动物中心提供；白藜芦醇为Sigma公司产品，使用前用DMSO溶解配成240 mmol/L；caspase6多克隆抗体为Santa Cruz公司产品； caspase6抑制剂VEID-fmk为Clontech公司产品；caspase6底物ACVEID-pNA为Alexis公司产品；9600型基因扩增仪为PE公司产品；ELx 800型酶标免疫测定仪由BioTek公司生产；RTPCR试剂盒由中山大学达安基因股份有限公司提供。 　　1.2 方法 　　1．2．1 RTPCR检测caspase6 mRNA的表达 总RNA的提取：分别收集白藜芦醇0 μmol/L、30 μmol/L、60 μmol/L、120 μmol/L、240 μmol/L处理24 h的鼻咽癌大鼠CNE2 Z细胞，严格按操作规