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皮肤血管瘤组织中细胞周期素E阳性面积率及平均光密度表达 　 作者：唐吉云 张端莲 陕声国 【关键词】 皮肤血管瘤；,,细胞周期素E；,,阳性面积率；,,平均光密度,,,, 　　摘要： 目的: 探讨细胞周期素E(cyclin E)在皮肤血管瘤组织中的表达及临床意义。方法：采用免疫组织化学（SP法），检测人皮肤血管瘤增生期、退化期及正常皮肤组织血管内皮细胞的cyclin E表达水平，利用图像分析技术检测不同时期血管瘤和正常皮肤组织的阳性面积率和平均光密度。结果： 增生期血管瘤内皮细胞cyclin E表达水平明显高于退化期及正常皮肤组织，差异有显著性意义（Plt;0.01）；退化期与正常皮肤组织血管内皮细胞cyclin E表达水平差异无显著性意义（Pgt;0.05）。结论： 血管瘤的发生、发展与细胞周期的调节密切相关。 　　关键词： 皮肤血管瘤； 细胞周期素E； 阳性面积率； 平均光密度 　　血管瘤是婴幼儿中发病率最高的一种以内皮细胞异常增殖为组织学特征的肿瘤。新生儿患病率为1.1%~3.8%，至1岁时可高达10%。目前成人病历也逐渐趋上升趋势。虽然部分血管瘤可以自行消退，但仍有部分未退化的血管瘤可持续发展或其生长部位特殊而具有一定的危险性，如果位于颜面、颅内及口腔可引起明显的畸形及功能障碍，如持续发展可产生溃疡、出血、感染等一系列并发症；位于颜面及口腔的血管瘤可引起明显的外观畸形及功能障碍，严重影响患者的身心健康。临床治疗尤其对于大面积血管瘤的治疗尚缺乏确切、迅速有效的方法。虽然血管瘤各期的组织形态学特征已经通过免疫组织化学方法鉴定出来，但其发病机制尚不清楚，因此，也难以寻找到一种有效的治疗手段。细胞周期素E (cyclin E)［1］是细胞周期重要的调节因子, 细胞周期的调控与细胞增殖、分化及恶性肿瘤的发生和发展过程均有密切的联系。我们采用免疫组织化学（SP法），检测人皮肤血管瘤增生期、退化期及正常皮肤组织血管内皮细胞的cyclin E表达水平，探讨细胞周期调节因子cyclin E在血管瘤发生、发展中的作用。 　　1 材料 　　11 材料来源 　　收集武汉大学人民医院病理科2002~2005年皮肤血管瘤存档蜡块50例，其中男性26例，女性24例，年龄2月~67岁，平均32.5岁。血管瘤位于头皮、眼睑、耳部、颈部、胸部、上臂、手部及大腿等部位。患者术前均未做任何辅助性治疗。 　　12 材料分组 　　蜡块切片厚5um,常规HE染色和免疫组织化学SP法检测血管瘤组织中cyclin E的表达。按Mulliken［2］分类标准将切片分组，其中增生期血管瘤24例，退化期血管瘤26例。另取瘤组织周围正常皮肤5例作为对照。 　　2 主要试剂 　　兔抗人cyclin E 单克隆抗体，通用型 SP免疫组织化学试剂盒，DAB显色试剂盒及多聚赖氨酸，以上试剂均购于福建迈新生物科技开发公司。 　　3 实验方法 　　31 常规 HE染色 　　32 免疫组织化学SP法检测cyclin E相关抗原 　　主要步骤：5um组织切片常规脱蜡至水。cyclin E采用高压修复抗原。3％过氧化氢处理10min以抑制内源性过氧化物酶活性，正常羊血清封闭10min以减少非特异性着色。一抗37℃孵育3h后4℃过夜。生物素标记的二抗处理15min,链霉抗生物蛋白过氧化物酶复合物处理15min。DAB显色，苏木素复染，脱水，透明，封片。用PBS代替一抗作阴性对照，人乳腺癌标本作为cyclin E阳性对照。 　　4 免疫组织化学结果判断 　　cyclin E以胞核出现棕黄色颗粒为阳性反应。阴性对照组除胞核染成蓝色外，应无棕黄色反应物。 　　采用HPIAS2000型图像分析软件对cyclin E的表达进行定量分析。每张切片随机选取5个高倍镜视野（×400），测定每个视野下染色的阳性面积率和平均光密度。以每例5个视野的阳性面积率和平均光密度的平均值作为该例的测量值。 　　5 统计学处理 　　用SPSS 11.5统计软件对三组样本阳性颗粒的平均光密度和阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验，检验水准α为0.05。 　　6 结果 　　61 HE染色 　　增生期血管瘤组织中可见大量增生活跃的内皮细胞，内皮细胞核肥大而淡染。退化期血管瘤组织中血管内皮细胞明显减少，形成大量的毛细血管腔，血管间结缔组织增多，内皮细胞核扁平。 　　62 cyclin E的表达 　　增生期血管瘤内皮细胞核中有大量棕黄色颗粒，cyclin E表达强；退化期和正常皮肤组织中，血管内皮细胞核仅有少量棕黄色颗粒，cyclin E表达弱。 三组样本的阳性面积率和平均光密度的图像分析结果见表1。经单因素方差分析，三组样本cyclin E的表达差异有显著性意义（Plt;0.05）。经SNK（q）检验，增生期组与退化期组、增