直肠癌组织中TAM计数及EMMPRIN、IL8、MCP1表达相关性.docVIP

直肠癌组织中TAM计数及EMMPRIN、IL8、MCP1表达相关性 　【摘要】 目的 研究直肠癌组织中TAM计数及EMMPRIN、IL8、MCP1表达水平并探讨其相互关系和临床病理意义。方法 41例直肠癌手术切除标本和15例上切缘非癌粘膜组织常规制作石蜡包埋切片，免疫组化分别染TAM、EMMPRIN、IL8和MCP1。结果 癌组织TAM计数及EMMPRIN、IL8、MCP1表达阳性率明显高于非癌组织；高、中分化腺癌和肿块最大径≤5cm病例，TAM计数明显低于低分化腺癌和肿块最大径gt;5cm病例；癌细胞未浸及浆膜层病例TAM计数及EMMPRIN、MCP1表达阳性率明显低于癌细胞浸润浆膜层病例；无淋巴结转移病例TAM计数及EMMPRIN、IL8、MCP1表达阳性率明显低于淋巴结转移病例；EMMPRIN、IL8和MCP1表达阳性直肠癌TAM计数明显高于阴性病例；直肠癌中EMMPIN、IL8和MCP1表达之间存在密切正相关系(Plt;0.05)。结论 TAM计数及EMMPRIN、IL8和MCP1表达可能是反映直肠癌发生发展，生物学行为和预后的重要标记物。 【关键词】 直肠癌；肿瘤相关巨噬细胞；细胞外基质金属蛋白酶诱导因子；化学趋化因子；免疫组织化学 Key words：Rectal cancer; Tumorassociated macrophage； Extracellular matrix metalloproteinase inducer; Chemokines; Immunohistochemistry 癌组织内浸润的巨噬细胞称肿瘤相关巨噬细胞(tumorassociated macrophage, TAM), 近年发现TAM浸润数量与恶性肿瘤生物学行为和预后密切相关[1，2]。细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer, EMMPRIN)能诱导基质金属蛋白酶的生成，与恶性肿瘤侵袭潜能，转移发生及预后密切相关[3，4]。化学趋化因子已发现50余种，均为小分子蛋白质，IL8属CXC亚家庭主要成员，单核细胞趋化蛋白(monocyte chemoattractant protein1, MCP1)为CC亚家族主要成员。近年发现IL8和MCP1表达水平也与恶性肿瘤发生进展、血管生成及预后密切相关[510]。作者应用免疫组化方法研究TAM计数及EMMPRIN、IL8、MCP1表达水平，探讨它们之间的相互关系及其临床病理意义。 1 资料与方法 1.１ 临床病理资料 收集我院2001年1月～2003年6月直肠癌手术根治术标本41例，男22例，女19例，34～80岁，平均年龄(56.9±11.9)岁。病理类型：腺癌36例，印戒细胞癌3例和粘液腺癌2例。分化程度：高分化6例，中分化28例，低分化7例；癌细胞未浸及浆膜层6例，浆膜层35例。肿块最大径lt;5cm 28例，gt;5cm 13例；有26例发生区域淋巴结转移。另收集15例相同直肠癌根治术标本上切缘的非癌直肠粘膜组织，HE染色，光镜观察粘膜上皮轻度不典型增生3例，中度和重度不典型增生各2例，8例为完全正常肠粘膜。上述标本经10%福尔马林固定后常规制作石蜡包埋连续切片，4μm厚。 １．2 主要试剂 鼠抗人CD68单克隆抗体，免抗人EMMPRIN、IL8、MCP1多克隆抗体，生物素标记羊抗鼠IgG，生物素标记羊抗兔IgG，ABC试剂，以及DABHCL显色试剂盒均购自武汉博士德公司。 １．3 方法 TAM、EMMPRIN、IL8和MCP1染色方法均为常规ABC免疫组化法。TAM免疫组化反应产物定位于胞浆和胞核， 见图1，EMMPRIN，IL8和MCP1免疫组化反应产物定位于胞浆，见图2～4。TAM计数方法参照Ohno法，高倍镜下随机观察10个癌组织视野，计数各视野内TAM数，均值为该病例TAM计数[1]。将切片中EMMPRIN、IL8和MCP1阳性细胞率≥20%为阳性病例，lt;20%为阴性病例。以博士德公司提供的阳性切片作为阳性对照，以0.01 MPBS液(pH 7.4)替代一抗作为阴性对照。 1.4 统计学处理 将所得数据输入SPSS10.0软件包进行t检验、χ2检验，Fischer精确概率法及等级相关分析，检验水准α=0.05。 2 结果 41例直肠癌TAM计数为（26.8±8.5）个/HP，15例残端非癌肠组织为（16.4±7.2）个/HP，两者存在高度显著差异(t=4.33, Plt;0.01)。高分化、中分化腺癌及浸润至肌层、肿块最大径≤5cm和无淋巴结转移病例TAM计数明显低于低分化(高分化：t=3.