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上海水产大学实验课程教学大纲 《光镜与电镜技术实验》教学大纲 课程名称（中文/英文）：光镜与电镜技术　　课程编号课 程 类 别：专业选修课 教 材 名 称：实用生物医学电子显微镜技术 学 时 学 分： 学时：２４ 　学分：２　　实验学时：１６ 应 开 实验学期：　２ 年级：３年级 　　学期：三年级上学期 先 修 课 程：光镜与电镜技术 适 用 专 业：生物技术、生物科学、水产养殖、环境科学等 一、课程性质及要求 本课程包括了光学显微镜调试、电镜生物样品的制备与电子显微镜操作等方面的内容。主要介绍光学显微镜的“库勒照明调节法”和显微摄影技术，电镜部分包括生物样品从取材、固定到超薄切片，生物样品的脱水、干燥，表面喷镀金属薄膜等生物样品的一般制备方法。 本实验能够对研究用显微镜、透射电镜、扫通电镜、超薄切片机、制刀机、组织自动包埋机、真空镀膜仪、离子镀膜仪、临界点干燥仪、冰冻样品处理装置等仪器的常规操作方法做较详尽的叙述。经本课程学习之后，只要严格遵循本指导 , 学生就能基本了解并掌握该类仪器的常规操作和使用。 二、内容简介（200字左右） 光镜部分：通过特种显微镜的使用，针对暗场、相衬与荧光显微镜的特性，特种样品的镜检，使学生了解各类显微镜的特性并掌握其使用方法。实验内容包括了生物样品、激发滤色镜和盖玻片的正确选用，相衬、荧光、暗场显微镜与柯勒照明法的正确调整，半、全自动控制器、显微摄影软件及摄影拍摄的实际操作。 电镜部分：通过电镜样品制备实验，使学生基本了解扫描和透射电镜样品制备的一般方法和基本程序；通过切片制作实验，让学生基本掌握电镜切片基本制作方法。通过上机操作，使学生了解电镜使用方法和操作过程；运用电镜技术和组织化学原理，使学生了解细胞亚微结构精细分析。通过电镜生物样品的观察，使学生进一步认识细胞超微结构，并学会电镜拍照。 三、主要仪器设备： 万能显微镜等附件、OLYMPUS正置及倒置研究用显微镜、体视显微镜、CCD显微图像拍摄系统，透射电子显微镜、扫描电子显微镜、超薄切片机、临界点干燥仪、离子溅射仪、样品制备辅助设备等。 四、教学方法与基本要求 1．本课程以理论与实验教学相结合，任课教师需向学生讲清课程的性质、任务、要求、课程安排和进度、平时考核内容、期末考试办法、实验守则、大型仪器使用及实验室规章制度等。 2．该课分分二个环节：第一环节为理论教学，第二环节为实验部分。实验以演示为主，结合学生实际操作，教学中给出实验要求，学生实验前必须了解本课程的理论及实验内容后方可进入实验室进行实验。 3．本课程理论部分集中教学，实验教学部分学生按总人数分成二组，每组不超过16人。在规定的时间内，学生轮流独立完成实验内容。操作中若出现问题，实验指导教师可协助学生解决。 五、考核方法 本课程采用平时考核与期末考试相结合来评定学生总成绩。平时实验占总成绩40%，其中每个实验实际操作20%，实验报告20%；期末考试占总成绩60%。总成绩分按百分比计分。 六、实验项目设置 序号 实验名称 内容提要 实验 学时 每组 人数 实验属性 实验要求 1 光学显微镜成象系统调整与使用。 生物样品和盖玻片的正确选用，显微镜的光轴调节，柯勒照明法的正确调整及调试步骤。 2 16 演示及轮流操作相结合 初步掌握基本要领 2 光学显微镜样品拍摄。 明暗场、相衬及荧光显微镜的使用方法，显微拍摄技术，摄影软件的操作要领等。 2 16 演示及轮流操作相结合 初步掌握基本要领 3 载网支持膜制备、玻璃刀制作超薄切片机的使用。 掌握脱水之后组织块的包埋。承载膜制备、切片和染色技术以及LKB-V超薄切片和LKB7800制刀机的操作方法 2 16 演示及轮流操作相结合 初步掌握基本要领 4 照明系统合轴与成像系统合轴图象聚集。 通过面板按钮功能以及操作使用全过程的了解。使对本门课程理论教学时的带电子光学原理及透射电镜的结构与使用方面知识，有所巩固。 面板:A、B、C、D、E、F、G、H 电子显微镜图（示面板位置） 2 16 演示及轮流操作相结合 初步掌握基本要领 5 透射电镜消散电镜照片的拍摄。 透射图象的观察与记录：粗聚焦，细聚焦， “Function”→“Mag”→“10000 X。按压钮，使小荧光屏拾起，然后用双筒目镜聚集。 照相：红灯亮，则会聚电子束，右面红灯亮，则扩展电子束，后按压钮，则exp灯亮，胶片在进行曝光，曝光结束，曝光底片已被推入接受箱，此时，came a film Advance灯灭，就可再进行下一次的照相过程。 2 16 演示及轮流操作相结合 初步掌握基本要领 6 扫描电镜样品的脱水与干燥、粘样与镀膜。 扫描电镜的样品制备大体按下述流程进行：100% →中间媒介液替代剂→干燥→