端粒酶反义寡核苷酸对宫颈癌细胞体外生长及端粒酶活性影响.pdfVIP

黄永芳 2003届硕士研究生学位论文 fju 口 宫颈癌是全球妇女恶性肿瘤中最常见的恶性肿瘤之一，仅次于乳腺癌。在发展 中国家妇女中发病率居首位。宫颈癌的治疗目前以手术和放疗为主，但对于富颈癌 晚期和复发的患者，两者的临床治疗效果较差。 人端粒位于染色体末端，是由重复的“TTAGGG”六核苷酸组成o’。目前认为它的 主要功能是保护染色体末端，防止染色体的降解、重组、融合以及复制过程中的丢 失。随着细胞的不断分裂增殖，端粒会不断的缩短，导致染色体的不稳定，进而细 胞死亡”’。 端粒酶是核糖核酸(RNA)和蛋白质的复合物，主要由三个亚单位组成，即人类端 telomerase associated 粒酶RNA(human RNA，flTR)，端粒酶相关蛋白(telomerase telomerase protein，TPI)和人类端粒酶催化亚单位(human HTERT)。’．它能通过识别并结合于富含G的端粒末端，自身为模板，逆转录合成端粒， 使端粒，重排，延长，阻止端粒缩短，阻止细胞分裂死亡，使细胞永生化．“’。在缺乏端 粒酶的时候，正常的细胞会随着每一次的细胞分裂而丢失端粒DNA，当端粒缩短到一 至关重要的长度时，细胞进入死亡或停止增生(5-7)相反，端粒酶的存在，能使癌细 9)0 胞延长端粒，继续增生(8 近几年的研究证实人原位恶性肿瘤端粒酶活性表达约85—90％，大多数正常组织 则不表达，认为端粒酶的活化对维持肿瘤的生长起着重要作用“”。在宫颈癌中端粒 酶的活性与细胞分化和临床分期呈一定的相关性，细胞分化越差，临床分期越晚， 端粒酶的阳性表达率越高，宫颈浸润癌中端粒酶的活性达在90％以上“”。 由于端粒酶在肿瘤的发生发展中起重要作用，因此抑制端粒酶的活性可能会成 为治疗肿瘤很有潜力的方法。其中研究较多的是针对端粒酶RNA(hTR)的反义技术， 已取得了一定的进展。近几年的许多研究已经证实针对端粒酶RNA的反义寡核苷酸 在多种肿瘤中，如卵巢癌、膀胱癌、前列腺癌等，能有效的通过抑制端粒酶的活性， 4 黄永芳 2003届硕士研究生学位论文 延长肿瘤细胞的倍增时间，抑制移植瘤的生长(12-t4)但是由于细胞对寡核苷酸的摄 取问题，使得这种抑制作用没有得到充分的发挥。 凋亡的影响，探讨端粒酶ASON影响细胞生长的机制。 黄永芳 2003届硕士研究生学位论文 实验材料和方法 1实验材料 1．1主要仪器 荧光显微镜 PM一20日本 01mpus XSZ—D日本 倒置显微镜 Olmpus 电泳仪 DYY一3北京仪器六厂 SHIMADZU 分光光度计 UV一1206日本 C0培养箱 }IARRl日本 PERKIN PCR仪 EIMER日本 图像分析系统 Olmpus数码相机，摄像由黑马公司提供的黑马凝胶 成像系统，分析软件为LAB软件 1．2主要溶液的配制：