2006-04-20 表皮生长因子受体为靶向重组T7噬菌体抗肿瘤疫苗的构建及免疫活性_蔡新华.pdfVIP

细胞生物学杂志 Chinese Journal of Cell Biology 2006, 28: 217-222 表皮生长因子受体为靶向重组T7噬菌体抗肿瘤 疫苗的构建及免疫活性 1,3 3 2 3 3 3 3 * 蔡新华 　曾宪卓 　张尚权 　谈立松 　唐　亮 　刘　岽 　周彩存 1 2 (新乡医学院形态学研究室，新乡 453003； 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究 3 所，上海 200031；上海肺科医院肺癌免疫研究室，上海 200433) 摘要　　利用RT-PCR技术从人A431细胞中克隆表皮生长因子受体 receptor, EGFR)基因N端序列，经测序鉴定正确。将膜外序列不同功能及模拟抗原呈递较佳的亚 克隆DNA片段插入T7噬菌体表达载体，从而构建了重组T7噬菌体抗肿瘤疫苗并用于动物免疫注 射，用斑点印迹(dot blot)和MTT法分别检测到特异性抗体和细胞毒性Ｔ淋巴细胞反应。结果显示， 以噬菌体颗粒为载体的疫苗可以诱导体液免疫反应和细胞免疫反应。 关键词　　表皮生长因子受体；噬菌体展示技术；抗肿瘤疫苗；抗体；细胞毒性Ｔ淋巴 细胞反应 表皮生长因子受体(epidermal growth factor T7Packaging Extr acts 、T7SelectPackage Control receptor, EGFR)是具有酪氨酸激酶活性的跨膜受体糖 DNA 、T7SelectUP/DOWN Primer ，购自Novagen 蛋白，普遍表达于人体的表皮细胞和基质细胞，是 公司。p MD 18-T 克隆载体，购自TaK aRa 公司。 [1] 较早发现的肿瘤相关性抗原 。表皮来源的恶性肿 1.1.2试剂盒和试剂 T4 DNA连接试剂盒、 [2] 瘤组织中，EGFR呈不同程度的过度表达 ，与肿 ExTaq酶购自TaKaRa公司。小量柱离心式组织/细 瘤细胞的分化、增殖和迁移以及内环境的稳定密切 胞总RNA抽提试剂盒、小量胶回收试剂盒、柱离 相关，以EGFR为抗肿瘤治疗靶点的研究已取得一 心式小量质粒抽提试剂盒、病毒/液体DNA/RNA抽 定的进展。近几年来，应用针对EGFR的单克隆抗 提试剂盒、E.coli DH5 感受态细胞，购自华舜生 体进行抗肿瘤治疗得到较快的发展，并用于临床实 物工程有限公司。Reserve [3~5] 验 。这为抗肿瘤疫苗的发展研究打下了基础。 购自Promega公司。EcoRI和HindIII限制性内切酶 噬菌体作为载体的重组噬菌体疫苗已取得一定进 购自MBI公司。人A431细胞提取的EGFR购自Sigma [6,7] 展 。我们利用蛋白质分析软件得到EGFR膜外区 公司。人EGFR多克隆羊抗体购自R＆D Systems， 域具有最佳模拟空间结构和抗原性的多肽，并将其 Inc。