2010-03-25 整合素β1表达下调对非小细胞肺癌细胞迁移和黏附能力的影响_鞠立霞.pdfVIP

·188 · 肿瘤 20 10年 3月第 30 卷第 3期　TmorVo.l30, No.3, March, 20 10 DO:I10.3781 / .jissn.1000-7431.2010.03.004 BasicResearch·基础研究 β1 鞠立霞, 周彩存 (同济大学附属上海市肺科医院肿瘤科, 上海　2004 33 ) []　 构建整合素 β1基因特异的 RNA干扰质粒, 探讨抑制整合素β1蛋白表达对非小细胞肺癌(non-smallcelllng 目的: carcinom,aNSCLC)细胞生物 行为的影响。 根据 GenBank数据库提供的整合素 β1基因核苷酸序列, 选择设计 1条能 方法: 转录短发夹 RNA(smallhairpinRNA, shRNA)的 DNA序列, 命名为 17 -2;同时设计 1条非特异性序列作为阴性对照, 命名为 N。 将设计序列与 pUC19 质粒载体连接, 转化感受态大肠埃希菌, 挑选阳性克隆, 抽取重组质粒。 2 种重组质粒分别转染 NSCLC 耐药细胞株 PC-9/AB2 细胞, 用 G4 18 筛选后挑选单克隆并扩增获得稳定转染株。 荧光显微镜、实时荧光定量 PCR(rea-ltmie florescentqantitativePCR, RFQ-PCR)和Western印迹法检测整合素β1 mRNA及蛋白表达水平。 细胞划痕实验和黏附实验比 较整合素 β1对细胞迁移和黏附能力的影响。 结果:G418 筛选出稳定转染 2 种质粒的 PC-9 /AB2 细胞, 荧光显微镜下可见满 视野带绿色荧光的细胞, 转染 17 -2 组细胞中整合素β 1的 mRNA及蛋白表达水平明显低于转染 N组细胞及母细胞 PC-9 /AB2。 划痕实验和黏附实验表明, 整合素β 1抑制可以使细胞迁移和黏附能力明显降低。 结论:成功构建针对整合素 β1基因的特 异性 shRNA真核表达载体, 转染 NSCLC细胞后可抑制整合素 β1蛋白表达。 整合素β1表达抑制后细胞迁移和黏附能力明显 降低。 []　癌, 非小细胞肺;RNA干扰;整合素类;基因表达;细胞运动 []　R734.2　　[]　A　　[] 　1000-74 31(2010 )03-0 188-06 Effectofdown-reglationofintegrinβ1 onthemigrativeandadhesivecapacityofnon-smalllngcancercells J Li-xia, ZHOUCai-cn　(DepartmentofOncolog,yShanghaiPlmonaryHospita,lTongjiUniversity, Shanghai200433, China) [ ABSTRACT]　Objective:ToconstrctRNAinterferenceplasmidspecificforintegrinβ1 gen,eandtoexploretheeffectsofinhib-i tionofintegrinβ1 proteinexpressiononthebiologicalbehaviorofnon-smallcelllngcarcinoma(NSCLC)cells.Method:sGenomicse- qencesofintegrinβ1 genewasretrievedfromGenBank, andcDNAencodingsmallhairpinRNA(shRNA)forintegrinβ1 wasdesigned andnamedas17 -2.Anon-specificseqencewasdesignedasnegativecontrolandnamedasN.ThecDNAwassynthesizedandinserted intoplasmidspUC19.RecombinantplasmidswerethentransformedintocompetentE.col.iThepositivecloneswereselectedandrecom- binantplasmidswereextracted.ThetwoshRNAvectorsweretransfectedintoNSCLCcelllinePC-9/AB2 media