发酵工程第二章 发酵工业菌种的选育.ppt

第二章 发酵工业菌种的选育 菌株选育、分子改造 通过酶解破除细胞壁后制备微生物原生质体，然后诱导原生质体融合杂交，这种特殊的杂交方式即原生质体融合。 不受双亲亲和力的限制，打破种属间的遗传障碍，获得远缘杂交重组体。 　 2.5发酵工业菌种保藏 2.5.1 菌种退化 2.3.1 经典的分类鉴定方法 （4）氨基酸顺序和蛋白质分析 对某些同源蛋白质氨基酸序列的比较来分析不同生物系统发育的关系，序列相似性越高，其亲缘关系愈近。由此，可以根据蛋白质的氨基酸序列资料构建系统发育树并据此进行系统分类。 2.3.2 现代分类鉴定方法 （1） 微生物遗传型的鉴定 ① DNA的碱基组成 DNA的碱基组成和排列顺序决定着生物的遗传性状，分类学上，用（G+C）占全部碱基的质量分数（G+C）％来表示各类生物的DNA碱基组成特征。 测定DNA碱基组成的方法： 常用的有热变性温度法 浮力密度法 高效液相色谱法。 ② 核酸的分子杂交 不同生物DNA碱基排列顺序的异同直接反映这些生物之间亲缘关系的远近，碱基排列顺序差异越小，它们之间的亲缘关系就越近。 采用较为间接的比较方法——核酸杂交 DNA-DNA杂交 DNA-RNA杂交 ③ 遗传重组特性分析 染色体之间存在同源性才能发生遗传重组。 同源重组还涉及其他因素，因此，不能以同源重组作为唯一的判断标准。 通常具有种属特异性 ④ rRNA序列分析 原核生物16S rRNA和真核生物的18S rRNA的基因序列，根据序列差异计算它们之间的进化距离，画出生物进化树。 （2）细胞化学成分特征分类法 ① 细胞壁的化学组分及分枝菌酸分析； 细胞壁的化学组分比较常用的是红外光谱分析法。每种物质都有特定的光谱。这种技术适用于“属”的分类。 ② 全细胞水解液的糖型； ③ 脂肪酸组成及磷脂成分分析； ④ 醌类及多胺类的分析； ⑤ 可溶性蛋白的质谱分析 （3）数值分类法 也叫统计分类法。采用相同的可比特征（形态、生理、生化等），根据相似系数比较。 2.3.3 将菌种直接送到权威鉴定机构鉴定 ①中国微生物菌种保藏管理委员会（CCCCM） http：／／micronet．im．ac．cn／database／aboutccccmc．html ②中国科学院典型培养物保藏委员会（CTCCCAS） http：// ③中国典型培养物保藏中心（CCTCC） http： // ④中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC） http：／／china— 2.3.3 将菌种直接送到权威鉴定机构鉴定 ④中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC） http：／／china—cicc．org ⑤美国典型培养物保藏中心（ATCC） http：／／www．atcc．org。 ⑥英国国家典型培养物保藏中心（UKNCC） http：／／www．ukncc．CO．uk ⑦法国巴斯德研究所菌种保藏中心（CIP） http：／／cip．pasteur．fr ⑧德国科赫研究所菌种保藏中心（RKI） http：／www．rki．de 2.4 发酵工业菌种改良 目的 提高目标产物的产量 提高目标产物的纯度 开发新产品 防止菌种退化 自然选育 诱变育种 杂交育种 原生质体融合育种 基因工程育种　 菌种改良方法 自然选育操作步骤： 一般习惯上将自然选育称为菌种的分离纯化。 单细胞(孢子)悬液的制备 平板分离 挑选单菌落(注意形态的观察) 发酵试验 自然选育虽然突变率很低（ 10-8—10-5 ），但却是工厂保证稳产高产的重要措施。 2.4.1 自然选育 用各种物理、化学的因素人工诱发基因突变，进行所要求的变异菌种筛选，称为诱变育种。 是最常用的菌种改良手段。 包括诱变和筛选。 诱变剂：能够提高生物体突变频率的物质称为诱变剂 诱变剂 物理：紫外，快中子 化学：硫酸二乙酯，亚硝基胍 { 2.4.2 诱变选育 （2）诱变剂处理过程中几个有关的问题 化学诱变剂使用过程的安全性 诱变剂量的选择 诱变剂的选择 出发菌株的选择 （1）诱变剂的作用原理 用物理、化学、生物方法修改目的微生物基因组， 产生突变型。突变率10-6—10-3。 ？ （3）诱变育种的一般步骤 形态 理化筛选 从产物形成的生理生化途径着手，进行有的放矢的筛选。如结构类似物抗性、营养缺陷型等，筛选而产生的这些特性，称为遗传标记。 诱变剂的选择 诱变剂的剂量 出发菌株的准备 诱变 筛选 诱变的时间 （4）诱变育种的筛选方法 平皿快速检测法 高通量筛选 本质是基因重组 2.4.3 杂交选育 杂交育种是指将两个基因型不同的菌