微工-第五节.pptVIP

方法是将培养基制成软琼脂，盛入小试管或螺旋口小试管内。121℃高压灭菌后不制成斜面，用针形接种针将菌种穿刺接入培养基的1/2处。培养后的微生物在穿刺处及琼脂表面均可生长。然后覆盖2~3mm的无菌液体石蜡。 ◆液氮冷冻保藏技术 其方法是将浓的悬液加入灭菌后的分散剂中，细菌加入最终浓度为10%的甘油或5%二甲基亚砜pH7.6。这种营养明胶可制成良好的细菌悬液，许多细菌可保藏4年之久。此法操作简便但无菌要求较高。 ◆悬液保藏法  使微生物混悬于适当媒液中加以保藏的方法，其中蒸馏水保藏法较为常用。酵母菌、霉菌和放线菌的大部分均适用此法保存。 本章作业 菌种保藏的原理和常用的保藏方法？ * * ● 原理：微生物代谢不活跃； 休眠状态； 减少菌种变异。 ● 意义：微生物学研究的重要组成部分； 菌种是国家的重要资源。 5 菌种保藏的原理和方法 低温 干燥 无氧 缺营养 不利条件 在无菌间超净工作台进行接种操作 中国医学菌种保藏中心提供的标准菌株 美国国家菌种保藏中心提供的标准菌株 法国生物梅里埃公司提供的商业派生菌株（Bioball) 斜面传代法 穿刺法 砂土管保藏法 真空冷冻干燥保藏法 冷冻干燥保藏法 悬液保藏法 液氮保藏法 保藏方法 暂时保藏法 长期保藏法 1、斜面冰箱保藏法 4 ?C ； 3-6个月 2、沙土管保藏法 产孢子或芽孢微生物，1年 3、菌丝速冻法 甘油或二甲基亚砜作为保护剂，-20 ?C 4、石蜡油封存法 1年左右 5、真空冷冻干燥保藏法 任何微生物；一般5年以上 6、液氮超低温保藏法 -196 ?C ；保护剂；保存期长 把菌种接种到所需要的斜面培养基上，最适温度下培养，长出丰满的菌体细胞或孢子后，置于4℃的冰箱或冷库中保藏。 优点：方法简单、存活率高，具有一定的保藏效果。 ◆斜面保藏法 ◆穿刺保藏 其原理是将微生物吸附在各种载体上，干燥后保藏。一般将园土或耕作土研细、过筛，干燥后使用，在小试管内盛入土壤或砂子，121℃高压灭菌。细菌可加入浓的悬液，真菌和放线菌可直接刮下孢子混和，试管口可熔封亦可用石蜡封口后，仍放在干燥器械内在5℃保藏。 其保藏期一般为2年，有些微生物可长达10年之久。 ◆沙土管干燥保藏法 首先把加一定保护剂的菌悬液冷冻，然后在冷冻状态下予以真空干燥，使微生物细胞处于半永久的休眠状态，从而达到长久保藏的状态。 ◆冷冻真空干燥保藏法 安瓿管 ● 国内外主要菌种保藏机构介绍 （1）ATCC American Type Culture Collection.Rochvill.Maryland. U.S.A． 美国标准菌种收藏所，美国，马里兰洲，罗克维尔市． （2）CSH（Cold SPring Harbor Laboratory），U.S.A. 冷泉港研究室，美国。 （3）IAM（Institute of Applied.Microbiology），University of Tokyo,JaPan, 日本东京大学应用微生物研究所，日本东京． （4）IFO（Institute for Fermentation），Osska, Japan． 发酵研究所，日本大阪。 （5）KCC（Kaken Chemical Company Ltd），Tokyo，JaPan. 科研化学有限公司，日本东京。 （6）NCTC（National Collection of Type Culture），London United Kingdom． 国立标准菌种收藏所，英国伦敦。 (7)NIH（National Imstitutes of Health），Bethesda,Maryland,U．S．A． 国立卫生研究所，美国，马里兰洲，贝塞斯达。 （8）NRRL Northern Utilization Research and Development Division, U．S．Department of Agriculture, peoria,U．S.A. 美国农业部、北方开发利用研究部，美国皮奥里亚市． *