融合淀粉酶amyp-clo对大米生淀粉的高效降解.pdfVIP

微生物学报 A cta Microbiologica Sinica 2017, 57(8): 1301-1307 /actamicrocn DOI: 10.13343/ki.wsxb Research Article 研究报告 融合淀粉酶 AmyP-Clo 对大米生淀粉的高效降解 王静，翟璐，张销寒，李风玲，肖亚中，彭惠* 安徽大学生命科学学院，安徽省微生物与生物催化工程技术研究中心，安徽 合肥 230039 摘要：【目的】获得能高效降解大米生淀粉的α-淀粉酶。【方法】将来源Clostridium butyricum T-7 的α- 淀粉酶的淀粉结合结构域与能快速偏好性降解大米生淀粉的 α-淀粉酶 AmyP 的催化结构域融合重组表 达。【结果】融合蛋白AmyP-Clo 保留了野生型 AmyP 催化优势的基础上，对大米生淀粉的比活为 (373.9±8.4) U/mg ，4 h 内对5%大米生淀粉的最终降解率为(42.7±1.1)% ，对大米生淀粉的最高结合率为 (71.1±1.6)% ，这些数据相比AmyP 分别提高了 3.1、2.8 和 1.3 倍。【结论】融合蛋白AmyP-Clo 能高效 降解生大米淀粉，是一个具有优良应用价值的酶。 关键词：α-淀粉酶，大米生淀粉，融合表达，淀粉结合结构域 大米是世界约50%人口的主粮，其重要性不 能力[5–7] ，而这十余个酶中仅有2 个酶降解大米生 言而喻。但是大米淀粉的深加工应用却远没有小 淀粉的能力比降解小麦淀粉强，它们分别是来自 麦、玉米等淀粉广泛[1] 。一个重要原因是大米生淀 蚯蚓(Eisenia foetida) 的Amy II [5] 和来自Laceyella 粉的成分和结构远比小麦、玉米等淀粉复杂[2] 。近 sacchari 的淀粉酶[7] 。其余的α-淀粉酶降解小麦、 几年，随着无需糊化(高温破坏生淀粉结构的耗能 玉米等生淀粉的能力都远比大米强。此外，由于 过程)就能直接降解生淀粉的酶的深入研究，生淀 生淀粉具有致密的结晶结构，绝大部分生淀粉降 粉降解酶在方便食品、医药慢消化淀粉、多孔淀 解酶的降解速度都很慢, 常常需要24 h 以上。已 粉缓释剂、新型脂肪替代品等方面显示了广阔的 知的α-淀粉酶中仅有2 个能快速降解生淀粉。1 个来 应用前景[3–4] 。但是大部分生淀粉降解酶无法降解 自Anoxybacillus flavothermus ，降解5%的玉米生淀粉 大米生淀粉，或是降解能力很差。α-淀粉酶(EC 仅需2–3 h[8] ；另1 个来自Bacillus licheniformis ，降 )是三大类生淀粉降解酶之一。目前报道的 解 1%的玉米生淀粉只需 3 h[9] 。缓慢的降解速度 α-淀粉酶中只有十余个酶具有降解大米生淀粉的 极大影响了酶的应用。 基金项目：国家自然科学基金 ；安徽省杰出青年科学基金(170808J04) *通信作者。Tel ：+86-510；E-mail ：pph0259@126.com 收稿日期：2017-03-31 ；修回日期：2017-06-02 ；网络出版日期：2017-06-09 1302 Jing Wang et al. | Acta Microbiologica Sinica , 2017, 57(8) α-淀粉酶 AmyP 是前期工作中从海洋宏基因 配置在50 mmol/L 磷酸钠钾缓冲液(pH 7.5) 中，在 组文库中获得的一个新型淀粉酶[10] 。它不仅对大 40 °C 反应 10 min，立刻放置于冰冷的0.3 mol/L 米生淀粉具有绝对的偏好降解特性( 比活是其他 [14] Na2CO3 溶液中，骤冷终止反应 ，随后 4 °C 淀粉的4 倍以上) ，而且对各种生淀粉的降解速度 8000×g 离心 5 min ，取