药物代谢组学研究方法及其应用于肿瘤诊治.docVIP

　　药物代谢组学研究方法及其应用于肿瘤诊治 　　药物代谢组学（ pharmaco-metabonomics） 是在后基因时代和系统生物学的背景下，以代谢组学为平台，并与药学紧密交叉且有机结合而形成的一门新兴学科。它依托现代分析技术、化学计量学和生物信息学技术，通过分析比较给药前后生物体液中小分子代谢物轮廓的改变，进行药物疗效和毒性的评价和预测[1].在肿瘤的发生及进展中，肿瘤细胞中的微小变化都会引起代谢物的延增效应,产生大量的代谢物[2],而这些小分子的产生和代1映生物体系的状态[3].因此，药物代谢组学在肿瘤诊治、药物使用安全和预后评价中的作用越来越受到关注。本文就药物代谢组学的概念、研究方法及其在肿瘤诊治中的应用等方面的研究进展进行综述。 　　1 代谢组学和药物代谢组学的概念 　　1999 年，英国学者 Nicholson 等[4]将代谢组学（ metabonomics） 定义为： 以动物的体液和组织为研究对象，运用核磁共振（ nuclear magic resonance,NMR） 、色谱、质谱（ mass spectrometry,MS） 等分析技术，研究生物体对病理生理刺激或基因修饰产生的代谢物质如糖、脂质、氨基酸、维生素等的质和量的动态变化，它关注的对象是相对分子质量在1 000 以下的小分子化合物。2000 年，德国学者Fiehn 等[5]将代谢组学定位为一个静态的过程，也可称为代谢物组学,即对限定条件下的特定生物样品中所有代谢产物的定性定量分析，并按照研究目的不同，将生物体系的代谢产物分析分为 4 个层次，即代谢物靶标分析（ metabolite targetanalysis） 、代谢轮廓 （ 谱） 分析 （ metabolic profilinganalysis） 、代谢指纹分析 （ metabolic fingerprintinganalysis） 和代谢组学分析（ metabonomics analysis） . 　　随着代谢组学的发展，Clayton 等[6]于 2006 年提出了药物代谢组学的概念： 借助代谢组学技术平台，通过对个体给药前代谢物所包含的信息研究，预测个体对药物的代谢和毒性反应及其差异。药物代谢组学从系统生物学的角度，通过研究药物引起的内源性代谢物的动态变化，能够直接反映体内生物化学过程和状态变化，进而有助于在整体水平了解药物作用及其与内源性物质变化的关联[7],从而阐明药物的药效、作用机制和毒性进行预测。近年来，药物代谢组学在肿瘤诊治中的研究越来越广泛，特别是在肿瘤药物疗效判断、毒性作用、耐药预测、个性化用药以及肿瘤标志物发现上发挥重要作用。 　　2 药物代谢组学的研究方法 　　药物代谢组学的分析流程主要包括： 生物样品的采集与前处理、样品的制备和数据的采集、分析及解释等步骤。 　　2. 1 生物样品的采集与前处理 　　生物样品来自生物体液如唾液、眼泪、呼出空气、脑脊液、支气管肺泡灌洗液、胆汁、乳液、细胞提取物及组织提取液，其中血液和尿液最为常用。一般液体生物样品（ 尿液、血液、唾液） 的采集量为毫升级，固体生物样品（ 组织、器官） 的采集量为毫克级，细胞培养样品按细胞数计为 1 106~ 1 107级。为减少活性酶的影响，一般采取快速改变样本温度或 pH 来实现代谢灭活[8].目前生物样品的提取方法主要包括液液萃取、冷冻干燥、加速溶剂萃取、超声波萃取、固相萃取、固相微萃取等，其中以预冷（ -20 ℃或 4 ℃） 甲醇、甲醇-氯仿（ 3∶ 1） 液液萃取最为常用。Schaub 等[9]通过建立样本快速转移、灭活和定量化提取流程，有效提高了生物样品的回收率、准确性和重复性。 　　2. 2 生物样品的制备 　　根据不同的实验目的、样品种类和数据分析仪器，样品的提取制备步骤有所不同[10-11].比如，采用 NMR 为数据采集手段时，对样品制备要求相对简单，样品一般只需要加入缓冲盐溶液调节 pH,以减少酸碱度变化造成的化学位移偏差； 若以气质联用（ gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS）技术采集数据，样品在进样前需要做复杂的衍生化处理，最常用的是甲氧基胺肟化结合氮-甲基-氮-（ 三甲基硅烷基） 三氟乙酰胺（ MSTFA） 硅烷化的两步衍生化法，以降低待测物的沸点、提高稳定性、增强质谱响应、调节色谱行为； 若以液质联用（ liquidchromatography-mass spectrometry,LC-MS ） 技术采集数据，需要在样品中加入有机试剂或过滤膜以除去大分子蛋白[1]. 　　2. 3 数据采集和处理 　　代谢组学的数据采集和处理分析技术主要包括 NMR、MS 以及与气相、液相及毛细管电泳质谱联用技术，这些技术各有优缺点，互为补充