藏药材川西獐牙菜的红外光谱三级鉴定研究.docVIP

　　藏药材川西獐牙菜的红外光谱三级鉴定研究 　　 　　引言 　　 　　川西獐牙菜（Sussotii Franch.）属龙胆科獐牙菜属植物，我国境内主要分布于四川西北部、西藏、青海西南部和云南等地区[1,2],是藏族民间常用的单方草药，藏医药传统用药藏茵陈的代表品种[3].主要用于治疗消化不良、胆囊炎，各型肝炎等症[4-7].目前，对于川西獐牙菜及提取物中药理活性成分的检测多为獐牙菜苦苷、龙胆苦苷等裂环烯醚萜类化合物，芒果苷等口山酮类化合物，齐墩果酸等三萜类化合物以及当药黄素等黄酮物质等[8-10]. 　　 　　以多组分整体用药的中医和藏医理论来说，对于其中单个或多个目标成分的检测和控制并不能全面的反映原药材的质量及提取工艺的稳定性。而近年来被应用于药材分析研究[11,12]的红外光谱，具有快速、高效、样品用量少、操作简单、宏观整体特征性强等特点[13-15],在系统控制监测方面逐渐显示出其优势。以藏药材川西獐牙菜为研究对象，利用红外光谱的宏观指纹特性，对川西獐牙菜及其不同溶剂提取物进行系统的分析和比较，以期为传统用药的合理性和以现代监控手段分析传统藏药的思路提供依据。 　　 　　1、实验部分 　　 　　1.1试剂与仪器。 　　 　　实验中所用川西獐牙菜为2012年8月于青海省玉树州采集。经中国科学院西北高原生物研究所卢学峰博士鉴定，为川西獐牙菜（Sussotii Franch.）。甲醇，无水乙醇，正丁醇，乙酸乙酯，氯仿均为分析纯（天津市富宇精细化工有限公司）。 　　 　　Spectrum One傅里叶变换红外光谱仪（美国PerkinElmer公司）；Millipore超纯水器（美国Millipore公司）。 　　 　　1.2样品制备。 　　 　　采集的川西獐牙菜样品自然阴干后粉碎备用。称取粉碎后的川西獐牙菜150g,加入10倍体积提取溶液浸泡过夜后加热回流提取，回流发生开始计时，第一次提取2h后，将提取液移出；再加入6倍体积提取溶液提取1h,相同方法提取第三次，合并三次提取液，利用负压回收提取溶液，获得提取物。各提取物样品真空减压干燥后经溴化钾压片制样扫描，测定其红外光谱。 　　 　　1.3提取物红外光谱检测条件。 　　 　　Spectrum One型傅里叶变换红外光谱仪光谱范围：4 000~400cm-1;DTGS检测器，分辨率4cm-1;扫描次数16次；扫描时实时扣除水和CO2的干扰。 　　 　　1.4数据处理。 　　 　　采用Perkin-Elmer公司Spectrum 06.3.5操作软件计算3 000~800cm-1区域内不同红外光谱之间的相关系数。同时利用Origin软件获得二阶导数红外光谱。三级鉴定将药材及提取物的溴化钾压片放在变温池内，通过程序控制升温，从50~120℃每隔10℃进行原位实时扫描红外光谱，获得动态光谱集，采用清华大学分析中心红外光谱组自行设计的二维相关分析软件获得二维相关红外光谱。 　　 　　2、结果与讨论 　　 　　根据上述提取流程，用水、50%乙醇、75%乙醇、无水乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、氯仿和石油醚等不同溶液分别提取川西獐牙菜，计算各提取溶液的提取率，并对提取物中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷，芒果苷和齐墩果酸的含量进行HPLC检测发现，水提取川西獐牙菜和乙醇提取川西獐牙菜的提取率相对较高，随着提取溶液极性的逐渐降低，提取率也逐渐降低，二者呈现正相关性。不同溶剂提取物中，除獐牙菜苦苷之外，龙胆苦苷，芒果苷和齐墩果酸的含量均以75%乙醇提取物中最高，极性最小的氯仿所提取的混合物中，四种指标成分的含量均为最低。同时，不同提取物中，龙胆苦苷的含量明显高于其他三种指标成分。因此，实验中选择含量相对较高的龙胆苦苷作为指标成分进行红外光谱的对照。 　　 　　2.1川西獐牙菜原药材及不同提取物红外光谱分析及对比。 　　 　　2.1.1 川西獐牙菜原药材及不同提取物红外光谱分析。 　　 　　由表1和图1可以看出，川西獐牙菜氯仿提取物和乙酸乙酯提取物中主要含有酯类和萜类化合物，二者红外谱图较为相似。川西獐牙菜水提物和75%乙醇提取物的红外谱图相似，含有较多的糖（苷）类成分；同时，在75%乙醇提取物的红外光谱中2 853和1 704cm-1处吸收峰的增强，说明较水提取物而言，75%乙醇提取物中酯类化合物含量增加。 　　 　　指标成分龙胆苦苷在1 611和1 075cm-1处有两个主要特征峰，和川西獐牙菜及不同溶剂提取物红外光谱中这两个波数处的峰对应明显。此外，随着氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、水和75%乙醇提取物中龙胆苦苷含量的逐渐增加，提取物和龙胆苦苷红外光谱中所对应的两个特征峰的强度逐渐增加，不同溶剂提取物红外光谱与龙胆苦苷红外光谱在3 000~800cm-1区域内的相关系数也逐渐增大，依次为0.682 0,0.710