植物生理指标测定方法.docVIP

实验一 植物叶绿素含量的测定（分光光度法） (张宪政，1992) 一、原理 ??? 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。a 和b，两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。叶绿素a和叶绿素b的比值反映植物对光能利用二、材料、仪器设备及试剂 ?? 试剂：1）95%乙醇（或80%丙酮） 三、实验步骤??????称取剪碎的新鲜样品 0.2g，加乙醇10ml直至无绿色为止。把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内，以95%乙醇为空白，在波长663nm和645nm下测定吸光度。 ? ??? 四、实验结果计算叶绿素a的含量 =（(OD663?– 2.59(OD645）V/1000*W 叶绿素b的含量 =(22.88OD645?– 4.67OD663) V/1000*W 叶绿素a、b的总含量 =(8.04(OD663?+20.29(OD645) V/1000*W 按Inskeep公式叶绿素a的含量 =（(OD663?– 2.52(OD645）V/1000*W 叶绿素b的含量 =(20.47OD645?– 4.73OD663) V/1000*W 叶绿素a、b的总含量 =(7.90(OD663?+ 17.95(OD645) V/1000*W 注：1、叶绿素a和叶绿素b的比值反映植物对光能利用比如阳生植物叶绿素a和叶绿素b的比值较大 　阴生植物叶绿素a和叶绿素b的比值较小熔点:-94℃ 沸点:56.48℃是一种无色透明液体，有特殊的辛辣气味易溶于水和甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、吡啶等有机溶剂(张宪政，1992)采用电导法(张宪政，1992)：，包在密封袋内置于冰盒中带回实验室。将新鲜的叶样先用自来水轻轻冲洗叶片，除去表面沾污物，再用去离子水冲洗1~2次，用滤纸轻轻吸干叶片表面水分，称 g并剪成切段，放入50 mL带塞试管中，加入 mL 去离子H2O，浸没样品4~5 h，各处理浸泡时间和测定温度一致，在室温下进行，用DDs?11型电导仪测其电导率，然后沸水浴 min，冷却至室温再测一次总电导率值。以相对电导率表示细胞质膜透性大小。 us/cm*g) =SQ=测定电导率/称取质量 或 K（us/cm*g*ml）=SQ=测定电导率/称取质量*量取体积 （2）相对电解质渗出率. 电解质渗出率（%）= L1（浸泡液电导率）/ L2（煮沸后电导率）×100 电解质渗出率(%)= L1(浸泡液电导率)-本底电导率/[ L2（煮沸后电导率）-本底电导率]×100 式中：L1：组织杀死前外渗液的电导值；L2组织杀死后外渗液的电导值。 注：1、事先测定水的电导率 2、用吸水纸吸干探头的水分 实验三 植物体内游离脯氨酸含量的测定 一、目的 在逆境条件下（旱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸的含量显著增加，植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种积累的脯氨酸多。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲水性极强，能稳定原生质胶体及组织内的代谢过程，因而能降低冰点，有防止细胞脱水的作用。在低温条件下，植物组织中脯氨酸增加，可提高植物的抗寒性，因此，亦可作为抗寒育种的生理指标。 二、原理 磺基水杨酸对脯氨酸有特定反应，当用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸溶液中。然后用酸性茚三酮加热处理后，茚三酮与脯氨酸反应，生成稳定的红色化合物，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波长下测定吸光度，即可从标准曲线上查出脯氨酸的含量。 三、材料、仪器及试剂 1.试剂及配制： （1）2.5﹪酸性茚三酮溶液配制：将1.25g茚三酮溶于30ml冰醋酸和20ml 6mol·L－170℃）溶解，贮于4℃冰箱中，2-3日有效。 （2）3％磺基水杨酸配配制：3.496g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml。 （3）10μg·ml