番茄花柄脱落相关酶—多聚半乳糖醛酸酶的分离纯化与特性研究.pdfVIP

番茄花柄脱落相关酶— 多聚半乳糖醛酸酶的分离纯化 和特性研究1 李天来，徐杨，齐明芳，许涛 辽宁省设施园艺重点实验室，沈阳农业大学园艺学院，沈阳（110161 ） E-mail：qimf@ 摘 要：为弄清番茄花柄脱落相关酶— 多聚半乳糖醛酸酶（Polygalacturonase ，PG ）的性质， 为生产上通过调控PG 的活性来防止番茄花柄脱落提供理论依据，试验采用离体培养条件下 经乙烯处理的番茄花柄，提取、分离和纯化了多聚半乳糖醛酸酶，并对其主要性质进行了检 测，结果表明：采用Sephadex G-75 凝胶过滤层析、CM Sepharose CL-6B 阳离子交换层析分 离纯化，可得到分子量约为 30.2kD 的多聚半乳糖醛酸酶，纯化倍数为 30.85；经纯化所得 PG 的活性最佳pH 值为5.0 ，最佳反应温度为40 ℃；Km 值为26.14 mg·ml-1 ；30℃下PG 较 为稳定，温度高于40 ℃时酶有失活现象；添加1mmol/L 的Ca2+ 、Cu2+ 、Ba2+ 、Co2+和Mn2+ 2+ + 2+ 2+ 3+ 等矿质离子可抑制PG 活性，而添加 1mmol/L 的Mg 、K 、Fe 、Zn 和Fe 等矿质离子 可促进PG 活性，尤其是添加20mmol/L 的Fe2+ 、Zn2+和Fe3+等矿质离子可显著促进PG 活 性。上述结果说明：生产上采用较高温度调控PG 活性以防止番茄花柄脱落难以取得效果； 而采用Ca2+ 、Cu2+ 、Ba2+ 、Co2+等离子调控PG 活性以防止番茄花柄脱落可能取得一定效果。 关键词：番茄；脱落；多聚半乳糖醛酸酶；纯化；性质 中图分类号：Q556+.2；S62 1. 引言 番茄栽培中常因落花、落果而影响产量，尤以设施番茄栽培为重，受到生产者的极大关 注。许多研究表明，植物器官脱落与其离区细胞壁降解酶系统密切相关，其中多聚半乳糖醛 酸酶（Polygalacturonase ，PG ）活性升高与植物器官离区脱落进程的强度相一致，且位于细 胞分离的部位[1-3]，被认为是植物离区发生脱落的重要水解酶之一。有关多聚半乳糖醛酸酶 的研究，目前已经深入到基因水平，现已在番茄中确定了7 个多聚半乳糖醛酸酶基因，即： TAPG1、TAPG2、TAPG3、TAPG4、TAPG5、TAPG6 与TPG7，而且明确了TAPG1、TAPG2 、 TAPG4 和TAPG5 在乙烯诱导的叶片和花柄脱落区中表达[4-6] 。但这些基因的表达非常复杂， 现仍未明确在番茄花柄脱落中起决定作用的基因，尤其是在短期内尚难以通过基因工程方法 控制番茄花柄脱落[7]，因此采取一些措施调控多聚半乳糖醛酸酶的活性，以达到防止番茄花 柄脱落的目的不失为一种有效方法之一。然而，有关多聚半乳糖醛酸酶的性质目前尚不够清 晰，特别是尚未发现有关对番茄花柄中多聚半乳糖醛酸酶进行纯化及其性质研究的报道。本 研究通过分离纯化番茄离体花柄的多聚半乳糖醛酸酶，并对其主要性质进行研究，目的是为 番茄花柄脱落的调控奠定基础。 2. 材料与方法 供试番茄(Lycopersicon esculenyum L.) 品种为“辽园多丽”，日光温室内育苗和栽培，其方 法与一般生产相同。参照王彦昌等[7] 的方法，在番茄开花当天上午剪取各株相同或相近位置 花序上正常开放的花，放入盛有蒸馏水的烧杯中，在实验室中用自来水冲洗后，再用蒸馏水 1本课题得到教育部博士点基金（番茄花柄脱落相关酶—纤维素酶与多聚半乳糖醛酸酶的性质及活性调控研 究（20040157004 ））的资助。 - 1 - 冲洗3 次，剪去花柄上端花冠，只留花柄部分，插入装有1％琼脂培养基的培养皿中。并将 其放入含有20µL·L-1 乙烯培养箱中，于25 ℃恒温培养，用40W 日光灯2