2010-1014-第5讲基因工程 -操作.ppt

基因工程 第四节 基本操作过程 供体 + 载体 重组体 受体 工程细胞 一、分离：提取、制备目的基因和载体DNA （一）目的基因概论 1.目的基因的定义： 目的基因指基因工程要克隆和表达的靶基因，要获得该基因产物的目标基因。因为多来自另一不同生物基因组，故称外源目的基因。 2.目的基因要求： 必须获得高纯度、足数量、质完整的目的基因，才能克隆、扩增和表达出目的基因产物。 3.目的基因的用途： 理论上 ① 研究基因结构、功能及调控； ② 研究生物进化及相关同源性； ③ 与正常基因比较，查出异常， 确定疾病基因。 ? 从生物基因组中分离目的基因 原核生物基因组较小，基因容易定位，用限制性内切酶将基因组切成若干段后，用带有标记的核酸探针，从中选出目的基因。 真核生物一般通过基因组文库的方法获得目的基因。 ? 从mRNA获得目的基因 从基因的转录产物mRNA来反转录成cDNA作为目的基因，也可通过cDNA文库的方法获得目的基因。 ? 其他方法（见后） （二）构建DNA文库 基因组文库（genomic library） （含有全部基因） cDNA文库（complementary DNA library）（含有全部蛋白质编码的结构基因） 1.基因